HBV X基因转化人肝细胞的实验研究
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吴传湘 刘国珍 李涛 谭德明 刘洪波 中南大学湘雅医院感染病科 中南大学湘雅医院感染病科 中南大学湘雅医院感染病科 中南大学湘雅医院感染病科 中南大学湘雅医院感染病科
【摘要】选取已稳定转染HBV X基因的QSG7701细胞(pCMV X/QSG7701),并以稳定转染空质粒pRc/CMV2的QSG7701细胞(pRcCMV2/QSG7701)及未转染的QSG7701细胞为对照,用免疫荧光方法检测pCMV X/QSG7701细胞中HBX蛋白的分布;用RT-PCR方法和免疫细胞化学法分别检测细胞中c-Myc表达;用光镜及电镜观察细胞形态学变化,进一步研究乙肝病毒(HBV)X基因对永生化非瘤性人肝细胞QSG7701的转化作用.研究发现,乙肝病毒X(HBX)蛋白主要分布在细胞膜及细胞浆;c-Myc mRNA及c-Myc蛋白在3种细胞中均有表达,但转染了X基因的细胞中c-Myc的表达水平较其他两组明显升高(P0.01);光镜和电镜下观察发现pCMV X/QSG细胞的胞核较大,核膜增厚,核仁肥大且增多,核/浆比例失调,可见少量多核巨细胞,pRc-CMV2/QSG7701细胞与QSG7701细胞核浆比正常,染色质分布均匀,胞核大小及形态正常.结果表明,HBVX基因成功转染了QSG7701细胞,HBV X蛋白主要分布于转染细胞的细胞膜和细胞浆中,HBX可能通过上调转染细胞中c-Myc蛋白的表达而使细胞具备恶性化生长的倾向.
【关键词】 乙肝病毒 X蛋白 转化 人肝细胞
【基金】湖南省科技厅科技计划项目(2007SK3033)
【分类号】R512.6;R735.7
乙型肝炎病毒X基因(HBV X)及其编码的多功能蛋白(HBX)在乙肝相关肝细胞癌(HCC)的发生发展中起着重要的作用,但关于HBV X能否直接转化人肝细胞一直存在着争议.我们以人源性永生化非瘤性肝细胞株QSG7701为靶细胞,研究HBV X在体外对人肝细胞的转化情况及其可能的机制.1材料与方法
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摘要：选取已稳定转染HBV X基因的QSG7701细胞(pCMV X/QSG7701)，并以稳定转染空质粒pRc/CMV2的QSG7701细胞(pRcCMV2/QSG7701)及未转染的QSG7701细胞为对照，用免疫荧光方法检测pCMV X/QSG7701细胞中HBX蛋白的分布；用RT-PCR方法和免疫细胞化学法分别检测细胞中c—Mvc表达：用光镜及电镜观察细胞形态学变化，进一步研究乙肝病毒(HBV)X基因对永生化非瘤性人肝细胞0SG770l的转化作用。研究发现，乙肝病毒X(HBX)蛋白主要分布在细胞膜及细胞浆；c-Myc mRNA及c-Myc蛋白在3种细胞中均有表达，但转染了X基因的细胞中c。Myc的表达水平较其他两组明显升高(P<0.01)：光镜和电镜下观察发现pCMVX，QSG细胞的胞核较大，核膜增厚，核仁肥大且增多，核/浆比例失调，可见少量多核巨细胞。pRc-CMV2，QSG7701细胞与QSG7701细胞核浆比正常，染色质分布均匀，胞核大小及形态正常。结果表明，HBV X基因成功转染了QSG7701细胞，HBV X蛋白主要分布于转染细胞的细胞膜和细胞浆中。HBX可能通过上调转染细胞中c-Myc蛋白的表达而使细胞具备恶性化生长的倾向。
关键词：乙肝病毒；X蛋白；转化；人肝细胞
中图分类号：R575/3
文献标识码：A
文章编号：1007-7847(2008)02-0179-05
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