以P型PRSV-vpg为模板多位点突变获得w型PRSV-VPg的研究
以P型PRSV-VPg为模板多位点突变获得W型PRSV-VPg的研究,基因改造,长引物延伸,套叠PCR.,定点突变,氨基酸序列,片段,基因突变
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胡正龙 肖旭倩 沈文涛 言普 周鹏 海南大学;中国热带农业科学院热带作物生物技术研究所;
【摘要】以P型PRSV-VPg(Papaya Ringspot Virus,VPggene)基因为模板利用高保真酶通过两对引物(突变4个位点),PCR扩增获得一条276bp和一条141bp的两个小片段.以此为基础,利用长引物延伸和套叠PCR的方法,定点突变剩余5个位点,最后拼接获得W型PRSV-VPg基因.结果表明通过上述方案可以成功改造P型PRSV-VPg基因,获得与W型PRSV-VPg同源的目的基因,成功率为100%.该技术可以绕开传统的通过寻找毒源进行RT-PCR方法和人工合成方法获得病毒基因,其技术操作简单,且节约时间和成本,并在人工合成基因、多位点基因定点突变等方面具有很好的借鉴作用和应用价值.
【关键词】 PRSV-VPg 基因改造 长引物延伸 套叠PCR. 多位点突变 模板 定点突变 氨基酸序列 片段 基因突变
【基金】国家自然科学基金资助项目(30760134)
【分类号】Q781
获得病毒基因的传统方法是通过寻找毒源并侵染和运用RT-PCR的方法获得其cDNA.但寻找毒源周期长、成本高,即便寻找到毒源后期鉴定克隆也要花费大量的时间.番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)按照寄主范围划分为P型和W型两种,地域上P型毒源在海南相对容易获得,而分离W
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摘要：以P型艘PRSV—VPg(Pagaya Ringipot viuas Vpg gene)基因为摸板利用高保真酶通过两对引物(突变4个位点)，PCR扩增获得一务276 bp和一条141 bp的两个小片段.以此为基础，利用长引物延伸和套叠PCR的方法，定点突变剩余5个位点，最后拼接获得w型PRSV-VPg基因。
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