发光杆菌碳端截短的Mcf毒素杀虫活性研究
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2009年12月1日
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谭思维 丁学知 夏立秋 吴峰 孙运军 张友明 湖南师范大学生命科学学院;
【摘要】发光杆菌能产生很多毒素杀死昆虫宿主.这些毒素中有一种叫Mcf致软因子,可以在大肠杆菌中表达并毒杀毛虫.通过同源性比对分析,在Mcf氨基酸序列中N端有一个BH3的区域,拥有BH3结构域的蛋白具有细胞凋亡的功能,推测保留N端BH3结构域的碳端截短Mcf毒素具有杀虫毒力.从发光杆菌属(Photorhabdus luminescens subsp.laumondii)中克隆了杀虫毒素基因mcf的5′端3960bp的核酸序列(包含BH3结构域),将该基因连接到E.coli表达载体pET28a上,并转入BL21(DE3).经IPTG诱导后,在SDS-PAGE上发现145kD的目的蛋白条带.利用亲和层析纯化得到纯毒素,分别对甜菜夜蛾一龄幼虫喂食生测和对甜菜夜蛾四龄幼虫(Spodoptera exigua)注射生测,显示该毒素具有喂食毒力和血腔毒力,证明含有BH3区域的碳端截短Mcf毒素有杀虫的生物活性.
【关键词】 发光杆菌 甜菜夜蛾 Mcf毒素 BH结构域
【基金】国家自然科学基金资助项目(30670052,30870064) 国家“863计划”项目(2006AA02Z187,2006AA10A212) 国家博士点基金项目(20060542006)
【分类号】S476.1
昆虫病原线虫共生菌是存在于昆虫病原线虫(Entomopathogenic nematodes,EPNs)肠道内的一类革兰阴性细菌,属肠杆菌科(Enterobacteriaceae)[1].目前,已经鉴定了的线虫共生菌有两个属,即异杆菌属(Xenorhabdus)[2]和发光杆菌属(Photorhabdus).其中,异杆菌属与斯氏属线虫(Steinerne
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摘要：发光杆菌能产生很多毒素杀死昆虫宿主，这些毒素中有一种叫Mcf致软因子，可以在大肠杆菌中表达并毒杀毛虫，通过同源性比对分析，在Mcf氨基酸序列中N端有一个BH3的区域，拥有BH3结构域的蛋白具有细胞凋亡的功能，推测保留N端BH3结构域的碳端截短Mcf毒素具有杀虫毒力，从发光杆菌属(Photorhabdus luminescens subsp.laumondii)中克隆了杀虫毒素基因mcf的5’端3960bp的核酸序列(包含BH3结构域)，将该基因连接到E.coli表达载体pET28a上，并转入BL21(DE3)，经IPl-G诱导后，在SDS-PAGE上发现145kD的目的蛋白条带，利用亲和层析纯化得到纯毒素，分别对甜菜夜蛾一龄幼虫喂食生测和对甜菜夜蛾四龄幼虫(Spodoptera ecigua)注射生测。显示该毒素具有喂食毒力和血腔毒力，证明含有BH3区域的碳端截短Mcf毒素有杀虫的生物活性。
关键词：发光杆菌；甜菜夜蛾；Mcf毒素；BH3结构域
中图分类号：Q939.96 文献标识码：A 文章编号：1007-7847(2009)04-0303-06
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