香蕉红素氧还蛋白酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定
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2009年12月1日
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程萍 冯仁军 袁克华 张银东 海南大学农学院;中国热带农业科学院热带生物技术研究所;
【摘要】结合改良的BD SMARTTMPCR cDNA Synthesis KitUser Manual cDNA合成试剂盒,反转录合成带有目的接头cDNA第一链,通过LD-PCR,扩增双链cDNA(dscDNA).产物经双酶切后回收,与经同样双酶切的酵母双杂交系统中pGADT7载体连接转化,并进行了鉴定.结果表明:提取的RAN的A260/A280=1.82,表明所提RNA纯度高;双链cDNA文库大于0.2kb,且弥散较长,成瀑布条带状;根据生长菌落计数,文库含有1.2×106转化子,重组子不同插入片段在0.3~2kb之间,表明该文库达到建库要求,为下一步进行酵母双杂交试验奠定基础.此方法用于构建cDNA文库与酵母双杂交系统相结合的研究目前尚未见过相关报道.
【关键词】 香蕉红素氧还蛋白 SMART法 cDNA文库 酵母双杂交
【基金】中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助项目(ITBBZD0735)
【分类号】Q943.2
香蕉(musa nana Lour.)是芭蕉科芭蕉属多年生大型常绿草本植物,分布于热带、亚热带100多个国家,但在大部分地区,香蕉常年都受到冬春寒流的侵袭,轻则香蕉叶、果受伤而减产,重则整株死亡.因此,研究香蕉产生寒害的机理,提高香蕉的抗寒力,在理论研究和生产实践中都具有重大的意义[
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摘要：结合改良的BD SMARTTMPCR cDNA Synthesis Kit User Manual cDNA合成试剂盒，反转录合成带有目的接头cDNA第一链，通过LD-PCR，扩增双链cDNA(ds cDNA)，产物经双酶切后回收，与经同样双酶切的酵母双杂交系统中pGADT7载体连接转化，并进行了鉴定，结果表明：提取的RAN的A260，A280=1.82，表明所提RNA纯度高；双链cDNA文库大于0.2kb，且弥散较长，成瀑布条带状；根据生长菌落计数，文库含有1.2×106转化子，重组子不同插入片段在0.3～2kb之间，表明该文库达到建库要求，为下一步进行酵母双杂交试验奠定基础，此方法用于构建cDNA文库与酵母双杂交系统相结合的研究目前尚未见过相关报道。
关键词：香蕉红素氧还蛋白；SMART法；cDNA文库；酵母双杂交
中图分类号：S668.1 文献标识码：A 文章编号：1007-7847(2009)04-0349-05
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