全人源抗结肠癌噬菌体单链抗体库的构建及筛选鉴定
EB病毒转化,噬菌体抗体库,结肠癌细胞系,癌旁组织,阳性克隆,噬菌体展示技术,结肠癌组织,鼻咽癌细胞系,免疫组织
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谢平丽 李官成 李艳东 周国华 李跃辉 郭锋杰 王甲甲 中南大学肿瘤研究所;
【摘要】采用体外致敏法和EBV转化技术联合噬菌体展示技术构建噬菌体呈现型单链抗体库.从中筛选获得阳性克隆,并进行ELISA、免疫组化及测序鉴定.结果得到了库容为4.0×109的初级噬菌体抗体库,全长ScFv(Single-chain Fv)基因的插入率为90%.筛选获得两个克隆对HT-29呈强阳性反应,而与HFF等人正常细胞系呈弱阳性或阴性反应.免疫组织化学鉴定表明克隆F12与结肠癌组织和结肠癌旁组织阳性率的差别有统计学意义.由上述结果可见构建库容量达4.0×109的全人源抗结肠癌噬菌体单链抗体库是完全可行的,经筛选及鉴定获得了特异性较强的噬菌体克隆,为结肠癌的临床导向诊断和治疗奠定了基础.
【关键词】 EB病毒转化 噬菌体抗体库 结肠癌细胞系 单链抗体 癌旁组织 阳性克隆 噬菌体展示技术 结肠癌组织 鼻咽癌细胞系 免疫组织
【分类号】R392
结肠癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,全世界每年有大约78200人患结肠癌[1],临床上其治疗仍以手术为主,但手术后复发率极高.目前常用的化疗药物对肿瘤的杀伤作用缺乏特异性,导致明显的副作用.因此,寻找特异性定位肿瘤的方法对提高肿瘤的综合治疗效果有重要意义.导向治疗是用对
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摘要：采用体外致敏法和EBV转化技术联合噬菌体展示技术构建噬菌体呈现型单链抗体库，从中筛选获得阳性克隆，并进行ELISA、免疫组化及测序鉴定，结果得到了库容为4.0×109的初级噬菌体抗体库，全长ScFv(Single-chain Fv)基因的插入率为90%，筛选获得两个克隆对HT-29呈强阳性反应。而与HFF等人正常细胞系呈弱阳性或阴性反应，免疫组织化学鉴定表明克隆F12与结肠癌组织和结肠癌旁组织阳性率的差别有统计学意义，由上述结果可见构建库容量达4.0×109的全人源抗结肠癌噬菌体单链抗体库是完全可行的，经筛选及鉴定获得了特异性较强的噬菌体克隆，为结肠癌的临床导向诊断和治疗奠定了基础。
关键词：EB病毒转化；噬菌体抗体库；结肠癌；单链抗体
中图分类号：R735.3+5 文献标识码：A 文章编号：1007-7847(2010)01-0057-05
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