重组人ASCT2胞外结构域ECL2在大肠杆菌中的表达及其鉴定
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欧阳东云 徐丽慧 高琦 郭贺 陈清 何贤辉 暨南大学组织移植与免疫实验中心;暨南大学再生医学教育部重点实验室;暨南大学生物工程研究所;
【摘要】中性氨基酸转运蛋白(ASCT2)是人类内源性病毒的包膜蛋白合胞素在细胞膜上的主要受体,ECL2是该受体的其中一个较大的胞外结构域.通过RT-PCR方法从人乳腺癌MCF-7细胞中克隆ASCT2基因编码区全长序列,再从中扩增ASCT2的胞外区ECL2序列,与pET-41b连接构建原核表达载体,重组质粒在大肠杆菌中获得高效表达,重组蛋白在N-和C-端分别融合谷胱甘肽转移酶(GST)和His6标签,融合蛋白在上清液和包涵体中均有表达,可溶性部分经亲和层析纯化获得高纯度的重组蛋白,该蛋白可结合在表达合胞素的MCF-7细胞表面,具有结合合胞素的潜在活性,这些结果为进一步研究ASCT2与合胞素的相互作用奠定了基础.
【关键词】 合胞素 中性氨基酸转运蛋白 胞外结构域 原核表达
【基金】国家自然科学基金资助项目(30572199) 广东省自然科学基金资助项目(8451063201000340) 暨南大学人才启动基金项目(51208004,51208017)
【分类号】Q786
人类内源性病毒(human endogenous retrovir-uses,HERV)是远古逆转录病毒在人类基因组中的遗迹,约占人类基因组总量的8%.与今天仍然活跃的逆转录病毒一样,一个典型的人类内源性病毒也有必需的gag,pol和env3个基因.这3个基因的两端被长末端重复序列(LTRs)分隔[1].合胞素(syncyt
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摘要：中性氨基酸转运蛋白(ASCT2)是人类内源性病毒的包膜蛋白合胞素在细胞膜上的主要受体，ECL2是该受体的其中一个较大的胞外结构域，通过RT-PCR方法从人乳腺癌MCF-7细胞中克隆ASCT2基因编码区全长序列，再从中扩增ASCT2的胞外区ECL2序列，与pET-41b连接构建原核表达载体，重组质粒在大肠杆菌中获得高效表达，重组蛋白在N-和C-端分别融合谷胱甘肽转移酶(GST)和His6标签，融合蛋白在上清液和包涵体中均有表达，可溶性部分经亲和层析纯化获得高纯度的重组蛋白，该蛋白可结合在表达合胞素的MCF-7细胞表面，具有结合合胞素的潜在活性，这些结果为进一步研究ASCT2与合胞素的相互作用奠定了基础。
关键词：合胞素；中性氨基酸转运蛋白；胞外结构域：原核表达
中图分类号：Q786 文献标识码：A 文章编号：1007-7847(2010)03-0213-06
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