RNAi沉默整合素连接激酶基因表达对膀胱癌细胞BIU-87增殖的影响
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2010年6月1日
整合素连接激酶(ILK),微小RNA,RNA干扰,稳定转染
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参见附件。
陈亮 王德林 黄飚 重庆医科大学附属第一医院泌尿外科;
【摘要】为了研究整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因沉默对膀胱癌BIU-87细胞系增殖产生的影响,应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,合成了4条针对ILK的miRNA干扰载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-ILK-miR(miR-1、miR-2、miR-3、miR-4)作为实验组,另设1条为阴性对照组,分别转染膀胱癌BIU-87细胞系.经杀稻瘟菌素持续压力筛选和有限稀释法培养获得稳定转染细胞株.采用RT-PCR和Western-blot检测各组对ILK基因的抑制作用,实验组miRNA对BIU-87细胞ILK mRNA和蛋白的表达均有明显的抑制作用,以miR-3组抑制效应最强.通过流式细胞术检测发现,miR-3组细胞周期G0/G1期细胞所占比例较未转染组明显增加,而S期则明显减少(P0.05).四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测发现,转染组细胞在体外的增殖能力较对照组明显下降(P0.05).证明RNA干扰技术能有效抑制靶基因ILK的表达,进而抑制了膀胱癌细胞系BIU-87的增殖.
【关键词】 膀胱癌 整合素连接激酶(ILK) 微小RNA RNA干扰 稳定转染
【基金】国家自然科学基金资助项目(30972999) 重庆市自然科学基金资助项目(CSTC2005BB5033)
【分类号】R737.14
膀胱癌是我国最常见的泌尿生殖系统恶性肿瘤,其发生、发展和侵袭转移机制尚未阐明.研究发现细胞增殖/凋亡失衡可能与大多数肿瘤的发生发展有密切关系.整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)是一种丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)蛋白激酶,它通过与整合素β亚单位结合,参与生物
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