深海嗜热噬菌体GVE2头尾连接蛋白EV8的原核表达和功能分析
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2011年2月1日
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周治东 金春英 吕华 王蔚 国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室;华侨大学化工学院;
【摘要】为了解头尾连接蛋白在噬菌体感染和装配中起的作用,对高温噬菌体GVE2(virulent bacteriophage ofGeobacillus sp.E263)的头尾连接蛋白EV8进行了原核表达和功能鉴定.将EV8编码序列克隆入pGEX4T-2原核表达载体,并转染大肠埃希氏菌BL21.诱导表达后用SDS-PAGE进行鉴定,显示获得相对分子质量约36kD的谷胱甘肽硫转移酶(GST-EV8)融合蛋白.Western blot检测发现EV8在GVE2感染后2 h开始表达,说明该蛋白为噬菌体晚期表达蛋白.免疫电镜定位表明头尾连接蛋白位于噬菌体头尾的连接处,为进一步研究高温噬菌体的组装和表达调控奠定了基础.
【关键词】 高温噬菌体 头尾连接蛋白 EV
【基金】国家自然科学基金资助项目(30800857) 福建省自然科学基金计划项目(2010J05074) 国家海洋局海洋生物遗传资源重点实验室开放研究基金项目(HY201102) 中国科学院海洋生物资源可持续利用重点实验室开放基金项目(LMB101005)
【分类号】Q78
海洋存在丰富的微生物资源,尤其是嗜热微生物已成为国际上的研究热点.现代理论和环境证据证明嗜热菌是地球上形成的第一类生命形式,同时嗜热微生物的高温酶在工业和分子生物学等方面有重要的用途[1~4].近年来,感染嗜热微生物的高温病毒(高温嗜菌体)引起越来越多的科研工作者
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