甘蓝型油菜BnCOP1基因的原核表达和纯化
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2011年3月1日
BnCOP基因,pColdTF,融合蛋白,蛋白纯化
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参见附件。
彭丹 周波 谢敏敏 唐冬英 赵小英 刘选明 湖南大学生物学院生物能源与材料研究中心;
【摘要】COP1蛋白是植物光信号调节网络中介导光信号转导的一个关键因子,对植物生长发育起重要调控作用.通过RT-PCR方法从甘蓝型油菜中克隆BnCOP1基因编码区全长序列,并将其连接到冷诱导原核表达载体pCold TF上,构建原核重组表达载体pCold TF/BnCOP1,转化大肠杆菌BL(21)star.通过IPTG法低温诱导表达融合蛋白.结果表明,重组质粒在大肠杆菌中获得高效表达,融合蛋白分子质量约为128 kD,融合蛋白在上清液和包涵体中均有表达,可溶性部分经亲和层析纯化和Western blotting检测证实获得了高纯度的重组蛋白,这些结果为进一步研究油菜BnCOP1的结构和功能奠定了基础.
【关键词】 BnCOP基因 pColdTF 原核表达 融合蛋白 蛋白纯化
【基金】国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2007AA10Z127) 国家自然科学基金资助项目(30800080)
【分类号】S565.4
COP1(constitutively photomorphogenic 1)是由邓兴旺从拟南芥中克隆出的一个与组成型光形态建成相关的关键基因[1].该基因编码的COP1是一个由675个氨基酸组成、相对分子质量为76kD的可溶性核蛋白,在二级结构上,它由N端的环形锌指结合域(ring finger zinc binding do-生命科
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