显性负性突变体对AP2α转录因子及其活性的影响
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2011年5月1日
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毕杨 何昀 龚敏 张赟 陈洁 李廷玉 重庆医科大学附属儿童医院营养研究中心儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室;
【摘要】转录蛋白2α(activator protein-2α,AP2α)的转录活性可能是全反式视黄酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)促进骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)神经分化的关键调控点,但具体机制尚不清楚,显性负性突变是研究基因功能的一个经典手段.以携带AP2α全长基因的pAd-AP2α质粒为模板,分别扩增缺失bHLH及缺失TAD区域的AP2α片段,采用AdEasy腺病毒包装系统获得两种AP2α缺失型显性负性突变体重组腺病毒Ad-dnAP2α-△bHLH及Ad-dnAP2α-△TAD,腺病毒感染ATRA诱导24 h的大鼠MSCs可观察到60%以上RFP阳性细胞.Real-time-PCR、Western blot及免疫荧光结果显示AP2α定位于MSCs细胞核,经A-TRA诱导24 h,AP2α的表达无变化,而其下游基因bcl-2及c-kit表达增高,两种缺失型显性负性突变体腺病毒感染MSCs对野生型AP2α的mRNA及蛋白表达没有影响,却能有效抑制AP2α对下游靶基因bcl-2和c-kit的转录激活作用.为进一步研究AP2α转录活性在ATRA诱导MSCs成神经分化中的作用提供重要的分子手段.
【关键词】 转录蛋白α 显性负性突变体 腺病毒 骨髓间充质干细胞
【基金】国家自然科学基金资助项目(30830106) 重庆市卫生局医学科研项目(2010-2-217) 重庆市自然科学基金资助项目(CSTC2010BB5097) 中国博士后基金资助项目(20100480667)
【分类号】R346
转录蛋白2(activator protein-2,AP2)家族是一类相对分子质量为52 kD的DNA结合蛋白,定位于细胞核,可细胞类型特异性结合多种基因的启动子特定位点,参与基因的转录调控,在组织形态发育、细胞生长、分化、凋亡和肿瘤发生中具有重要作用[1],其中AP2α与神经系统发育及神经细胞分
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