密度梯度离心分离大鼠卵巢卵泡膜细胞
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2011年6月1日
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董磊 宋张娟 汪洋 王青 温州医学院附属第一医院病理科;温州医学院病理生理教研室;温州医学院机能实验中心;
【摘要】探讨用密度梯度离心法快速、有效地分离大鼠卵泡膜细胞.选取23~25 d雌性大鼠卵巢,用Percoll密度梯度离心法将卵泡膜细胞分离纯化,3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)组织化学染色用于卵泡膜细胞纯度检测.分别用0.1 U/mL和1.0 U/mL卵泡刺激素(Follicle-stimulating hormone,FSH)及黄体生成素(luteinizing hormone,LH)处理细胞,无血清培养48 h后,酶联免疫法检测培养液中雄烯二酮和雌二醇的水平.分离所得细胞中,3β-HSD染色阳性细胞与总细胞数之比大于90%;LH组的雄烯二酮水平显著高于对照组和FSH组(P0.05),LH组中1.0 U/mL组的雄烯二酮水平又高于0.1 U/mL组.各组均未检测到雌二醇及孕酮.3β-HSD组织化学染色可快速有效地检验所分离的卵泡膜细胞的纯度,分离所得的卵泡膜细胞可对LH产生反应,且其中几乎没有混杂颗粒细胞.
【关键词】 离心法 梯密度 细胞分离 泡膜细胞 大鼠
【基金】浙江省教育厅科研基金资助项目(Y200803848) 温州市科技局科研基金资助项目(Y20080131)
【分类号】R363
哺乳动物的卵巢内卵泡的发育需要相关激素的调节才能完成.垂体促性腺激素(卵泡刺激素和黄体生成素)使原始卵泡开始发育,其过程中还产生大量的雌激素.雌激素是卵巢的颗粒细胞和卵泡膜细胞在垂体促性腺激素的作用下协同合成的.卵泡膜细胞合成的雄激素透过基膜进入颗粒细胞,并转
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