沉默Bmi-1基因表达稳定细胞株的建立及其生物学特性的研究
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2012年2月1日
Bmi-基因,乳腺癌,RNA干扰,MCF-细胞
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参见附件。
武向梅 余华荣 卜友泉 易发平 汪长东 刘革力 苟小燕 邓小园 宋方洲 重庆医科大学重庆市分子医学与肿瘤研究中心;重庆医科大学生理教研室;重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室;
【摘要】B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(B-cell-specific moloney murine leukemia virus insertionsite 1,Bmi-1)基因是多梳基因家族成员,参与细胞增殖调控.研究发现Bmi-1基因可能参与肿瘤的形成,可能成为肿瘤潜在的治疗靶点.用RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默Bmi-1基因表达观察其对乳腺癌细胞株MCF-7侵袭和转移等生物学特性的影响,以探讨Bmi-1在乳腺癌发生发展中的作用.PT67细胞包装质粒后产生的逆转录病毒感染MCF-7细胞,嘌呤霉素筛选建立稳定细胞株,稳定抑制Bmi-1的细胞株命名为MCF-7/Bmi-1si.通过RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测Bmi-1的表达量;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Transwell侵袭小室模型检测细胞体外侵袭和转移能力.MCF-7/Bmi-1si组与MCF-7和MCF-7/GFPsi组相比,Bmi-1 mRNA和蛋白表达量明显减少,克隆形成数及形成率也明显减少(P0.05).侵袭和转移实验表明:与MCF-7和MCF-7/GFPsi组相比,MCF-7/Bmi-1si组细胞在Transwell侵袭小室中24 h穿膜细胞数明显减少(P0.05).结果表明沉默Bmi-1基因表达稳定细胞株构建成功,Bmi-1基因表达的沉默能显著降低MCF-7细胞的体外增殖及侵袭转移能力.
【关键词】 Bmi-基因 乳腺癌 RNA干扰 MCF-细胞
【基金】重庆市自然科学基金资助项目(cstc2011jjA10035)
【分类号】R737.9
B细胞特异的莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(B-cell-specific moloney murine leukemia virusinsertion site 1,Bmi-1)基因是一种癌基因,参与细胞增殖调控,对于造血干细胞自我更新及分化潜能的维持至关重要[1,2].作为一种原癌基因,Bmi-1参与肿瘤的发生,还可与其它的原癌基因如ra
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