Euprosthenops australis牵引丝蛋白的原核表达
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2013年1月1日
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参见附件。
张秀丽 陈格飞 林瑛 李佳 孟清 东华大学生物科学与技术研究所;
【摘要】参照GenBank收录的牵引丝蛋白编码序列,经过密码子优化,人工合成3段cDNA序列:NT、CT和4Rep,由Ⅰ型限制性内切酶BsaⅠ和BspMⅠ介导无缝拼接,分别构建4RepCT、NT4RepCT、NT8RepCT和NT12RepCT重组模块.通过改造表达载体和优化培养温度,成功提高了4RepCT的表达量(30 mg/L).另外还首次成功表达NT4RepCT和NT8RepCT重组蛋白模块,表达量分别为21 mg/L和8.5 mg/L.4RepCT表达量的提高及NT4RepCT和NT8RepCT的成功表达证实了融合标签TRX有利于提高蛛丝蛋白的表达水平,为E.australis全长牵引丝蛋白的表达奠定了基础.
【关键词】 Rep 基因克隆 融合蛋白 原核表达
【基金】国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(2006AA03Z451) 国家自然科学基金资助项目(31070698) 教育部博士点基金资助项目(20120075110007)
【分类号】Q785
蜘蛛丝(Spider silk)是一种经济、环保、机械性能显著的新型生物医学材料,其优良的机械特性超过目前最好的人造纤维,在纺织、医学、军工等多领域具有很大的潜在应用价值[1～6].由于蜘蛛种内残食且产丝量少,不宜通过人工饲养来大规模获取蛛丝纤维[2].利用基因工程的方法表达蛛
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