gcm蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备
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2013年3月1日
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赵阳 彭佩莹 王静 周英 张义 唐超 任恋 彭夕洋 陈思行 李永青 吴秀山 湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心;
【摘要】gcm(glial cells missing)是调控神经元细胞和神经胶质细胞相互转化的一个基因开关.在gcm功能缺损的突变体中,预期的神经胶质细胞发育成神经元细胞;而在gcm过表达的突变体中,预期的神经元细胞转化为神经胶质细胞.此外,gcm还调控血浆细胞发育.为了进一步研究gcm在发育中的功能,需要获得gcm蛋白并制备其抗体.根据已报道的gcm基因序列,以果蝇cDNA文库为模板进行PCR扩增得到gcm部分编码区序列,然后将其连接到pET-28a载体以获得原核表达载体.重组载体经酶切测序鉴定确认后,转化大肠杆菌(E.coli)BL21,并用IPTG诱导融合蛋白表达.采用Ni-IDA凝胶柱亲和纯化蛋白,将纯化的His-gcm融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体效价.获得的gcm原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗gcm多克隆抗体,为gcm功能的进一步研究奠定了基础.
【关键词】 gcm 融合蛋白 多克隆抗体
【基金】湖南省普通高校学科带头人培养计划项目(湘教通2008-315)
【分类号】Q78
gcm skipped在FlyBase中标记为Dmel\gcm(CG12245,FBgn0014179),是果蝇中的蛋白编码基因.该基因位于二号染色体上,长1 911 bp,编码504个氨基酸,与已知的蛋白没有明显的同源性并且没有内部重复[1].研究显示gcm是一个具有新型DNA结合域的转录因子[2].glial cells missing(gcm)最
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