人巨细胞病毒pp65蛋白的原核表达及活性鉴定
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2013年4月1日
人巨细胞病毒pp蛋白,质谱,酶联免疫吸附(ELISA),免疫反应性,免疫原性
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参见附件。
许凤 邱义兰 邱果 李桑 何赛 郑姣 李小曼 刘如石 湖南师范大学生命科学学院;湖南师范大学医学院;
【摘要】以病毒全基因组为模板,通过PCR技术扩增HCMV pp65基因编码序列,其产物连接到pMD18-T质粒,酶切并回收目的片段后克隆到表达载体pTO-T7,然后将重组质粒pTO-T7-pp65转化大肠杆菌ER2566,大量表达后将重组蛋白进行质谱法分析鉴定,再利用Western blot以及间接ELISA进行重组蛋白的活性及抗原性鉴定.结果显示:通过SDS-PAGE鉴定可知,大肠杆菌可能表达出了重组蛋白,质谱分析结果说明了重组蛋白为pp65蛋白,具有极高可信度,其相对分子质量约为63 kD,从Western blot和间接ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)的结果可知,pp65蛋白作为抗原具有良好的免疫反应性与免疫原性,为制备相应的抗原诊断单克隆抗体打下了基础,同时也为开发HCMV IgG快速诊断ELISA试剂盒提供了可选原料.
【关键词】 人巨细胞病毒pp蛋白 质谱 酶联免疫吸附(ELISA) 免疫反应性 免疫原性
【基金】国家自然科学基金资助项目(31072141) 湖南省科技计划重点项目(2011SK2014) 长沙市科技计划重点项目(K1104047-31) 湖南省自然科学基金重点资助项目(12JJ2013) 湖南省高等学校科学研究青年项目(10B060) 湖南省科技计划项目(2013SK3129)
【分类号】Q784
人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)为一种核酸大小约235 kb的双链DNA病毒,直径约200 nm,衣壳由162个壳粒组成,外有包膜包被,属疱疹病毒科β疱疹病毒亚科,也是疱疹病毒中最大的病毒.HCMV的感染非常普遍,在我国,成年人群感染率可达60%~100%[1],而在发达国家中,人群感染
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