草鱼促性腺激素基因的原核表达及多克隆抗体的制备
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2013年4月1日
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王艳杰 刘琼 陈文娟 周毅 刘少军 李建中 湖南师范大学生命科学学院;
【摘要】选用原核表达载体pGEX-4T-1,分别插入草鱼GTH和FSHβ的cDNA序列,构建成N端含有GST融合蛋白标签的表达质粒,分别转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达出2个融合蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示重组融合蛋白GST-GTHα和GST-FSHβ的相对分子质量大约为35、38 kD.用抗GST标签的单克隆抗体分别对2个表达蛋白进行Western blot鉴定,结果显示重组蛋白表达正确.利用制备型SDS-PAGE纯化回收的蛋白并免疫新西兰大白兔,分别制备了抗GTH和抗FSHβ的具有较高效价的多克隆抗体.该结果为纯化天然GTH蛋白提供了有效的检测手段,也为进一步制备GTH单克隆抗体奠定了基础.
【关键词】 草鱼 促性腺激素 基因克隆 原核表达 多克隆抗体
【基金】国家自然科学基金资助项目(31272261;31072199) 留学回国人员科研启动基金资助项目(教外司留(2011)1568号)
【分类号】Q789
促性腺激素(gonadotropin hormone,GTH)是一类糖蛋白激素(glycoprotein hormones,GPHs),由脊椎动物垂体前叶细胞合成与分泌,其作用的靶组织是性腺,主要生理作用是刺激生殖细胞的生长、发育、成熟、排精及排卵[1].鱼类的GTH分为两类,GTHⅠ和GTHⅡ,分别对应于哺乳动物的促卵泡素
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