植物乳杆菌AY01 luxS基因表达模式与功能的研究(3)
2.2生长阶段luxS基因表达分析2.2.1RNA提取与分析
2%琼脂糖凝胶电泳结果显示,a、b、c、d 4点没有降解,且都具有清晰的两条带,根据Marker可判断该两条带分别为23S、16S rRNA(图2A)。此外,利用分光光度计测定a、b、c、d 4点的A260/A280比值分别为1.876、1.959、1.871、1.856,说明有微量DNA污染。因为mRNA selective PCR kit能去除少量DNA的干扰,所以对该RNA不需DNA酶处理,直接进行逆转录反应。
2.2.2 16S rRNA基因内参设定
运用半定量PCR方法扩增内参16S rRNA基因,确定a、b、c、d 4点内参16S rRNA PCR扩增量相同时模板cDNA的加样量。通过结果分析得知,当a、b、c、d 4点分别加1.26、1.52、1.05、0.94 μL模板后,其PCR扩增条带亮度基本一致(图2B) ......
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