1.3引物设计

    根据3年生滇龙胆转录组中GrHMA基因序列和原核表达载体pGEX-4T-l多克隆酶切位点，设计一对特异引物GrHMABamH I-F：5'一GG -ATCCATGTCTATGGTGGAAGTTTTGG-3'：GrHMAXho I -R： 5'-CTCGAGTCACATAATAGAACAAG-CATGGG-3'。

    1.4滇龙胆叶片总RNA的提取及GrHMA基因的扩增

    采用植物RNAiso for Polysaccharide-rich PlantTissue提取试剂盒，按照说明书提取滇龙胆叶片的总RNA，参照Reverse Transcriptase M-MLV(RNase H-)试剂盒说明书反转录为cDNA，-20℃保存备用。以cDNA为模板进行PCR扩增，反应条件为：94℃ 3min；94℃ 30s，54℃ 30s，72℃30s ......