一种在豌豆植物中瞬时表达外源蛋白的新方法(2)
1.2.3.2真空处理时间对工作效率的影响在真空压力(0.08MPa)和菌体工作液浓度(OD00=1.0~1.5)恒定的条件下选择真空处理时间分别为:1、10、15min对豌豆种子进行真空侵染,侵染后播种于土壤中,幼苗出土后紫外灯下跟踪绿色荧光蛋白的表达情况并记录。
1.2.3.3菌体工作液浓度对工作效率的影响
在真空压力(0.08MPa)和真空处理时间(1min)恒定的条件下选择菌体工作液浓度分别为:OD600=0.3、0.6、0.9、1.2、1.5对豌豆种子进行真空侵染,侵染后播种于土壤中,幼苗出土后紫外灯下跟踪绿色荧光蛋白的表达情况并记录。
1.2.4发芽种子真空侵染法与叶片注射法的比较
选择相同的菌体工作液浓度,分别采用叶片注射法及发芽种子真空侵染法进行接种,紫外灯下跟踪观察GFP的表达情况并拍照记录。在外源蛋白表达高峰期分别收集可溶性总蛋白,15%聚丙烯酰胺凝胶进行电泳后转膜,并以Rubisco大亚基作为内参 ......
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