一株裂解性低温假单胞菌噬菌体的分离及特性研究(2)
在lmL制备好的噬菌体悬液中加入EDTA(pH8.0)至终浓度20mmol/L,加入蛋白酶K至终浓度50μg/mL,加SDS为终浓度至0.5%,56℃温浴1h,利用酚/氯仿法抽提噬菌体DNA,利用乙醇沉淀法获得DNA,所得样品分别用HindⅢ、EcoR I、BamH I和Pst I进行酶切分析。1.9噬菌体蛋白组成分析[9]
将1L效价达到1010pfu/mL噬菌体富集液于4℃,11000g离心15min,收集上清并加入DNase I和RNase A(终浓度为1μg/mL),室温消化30min,加入NaCl至终浓度为1mol/L,冰浴1h。4℃,11000g离心10min,以去除细菌碎片,收集上清并加入PEG 8000至终浓度为10%,冰浴1h。4℃,11000g离心10min,收集噬菌体沉淀,用13mL SM缓冲液溶解,等体积的氯仿抽提,11000g离心10min收集水相。水相中加入05g/mLCsCl,溶解后利用Beckman离心机SW41于100000g离心24h,收集噬菌体,在SM缓冲液中透析 ......
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