1.2.3目的蛋白的纯化及Western-blot分析

    诱导后10mL菌液离心，弃上清、平衡缓冲液重悬沉淀，超声破碎，离心取上清。10倍柱体积的平衡缓冲液对层析柱进行平衡处理后，以每滴间隔15s的流速将上清进行挂柱，收集流穿液；用3倍柱体积的平衡缓冲液漂洗柱子，收集漂洗液；用1倍柱体积的洗脱液进行洗脱，收集洗脱液；用2倍柱体积的平衡液置换残留的洗脱液，最后用1倍柱体积的再生液再生柱子，收集再生液。取纯化各阶段所收集样品进行SDS-PAGE电泳分析。同样，取洗脱过程所获的样品SDS-PAGE电泳后，根据蛋白Marker的大小，截取PAGE胶进行转膜，PVDF膜经10%脱脂奶粉4℃封闭过夜后用1：2000比例稀释的一抗37℃摇床孵育lh，用含0.1%吐温20的PBS缓冲液漂洗3次.每次15min，然后用1：15000比例稀释的二抗37℃摇床孵育1h，用上述的缓冲液漂洗6次，每次10min，最后，加入底物，暗室X-光片显影观察分析。

    2结果

    2.1目的片段及载体的双酶切回收

    以质粒pEGFP-N2为模板扩增获得egfp基因，用限制性核酸内切酶Spe I和Xho I双切 ......