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编号:12712407
鼠源抗人乳腺癌MRPl/ABCC1噬菌体Fab抗体库的构建(3)
http://www.100md.com 2014年4月1日 《生命科学研究》 2014年第4期
     2结果

    2.1组织总RNA的提取

    经紫外分光光度仪测定,总RNA的浓度为9.64g/L,A260nm/A280nm=2.03。完整性良好(图1)。

    2.2重链Fd和轻链L基因的扩增

    以鼠源cDNA为模板,扩增重链Fd和轻链L基因。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳并成像,在重链Fd基因PCR扩增产物电泳图中,650bp左右处可见基因片段(图2);在轻链L基因PCR扩增产物电泳图中,650bp左右处可见基因片段(图3)

    2.3Fab抗体库的构建

    轻链L基因与T载体重组,平板上可见大量白色菌落和少量蓝色菌落,所有平板重组率均大于95%。白色菌落总数为1.03x105cfu。轻链L基因与pComb3载体重组,pComb3-L库容量为l.25xl05cfu。重链Fd基因与pComb3-L载体重组 ......
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