1 .2.2 蛋白样品的获得

    细胞标记48h后，吸掉培养基并进行胰蛋白酶消化，将细胞转移至离心管中，800 r/min离心收集细胞；加入150 μL细胞裂解液震荡裂解，12 000g离心30min，保留上清；BCA蛋门定量试剂盒进行蛋白定量。

    1.2.3 叠氮一炔基环化加成反应

    定量后取300 μg总蛋白，加入1.5 μL AlexaFluor 555荧光试剂和2μL催化剂，并用PBS(pH 7.8)补齐至400μL，置于恒温震荡仪中25℃反应1 h；反应结束后，甲醇氯仿法进行蛋白沉淀：样品中加入1.2 mL甲醇并混匀，加入300 μL氯仿并混匀，加入800 μL超纯水并混匀，15 000 g离心5 min弃上清，加入900 μL甲醇后15 000 g离心5 min，弃上清，空气中风干蛋白沉淀。

    1.2.4 等电聚焦

    用水化上样缓冲液将样品定容至300 μL；IPG预制胶条室温放置5 min；沿电泳槽边缘连续加入样品.不要产生气泡；去除预制IPG胶条上的保护层 ......