1.2.3 酵母表面展示T载体pYD-T克隆目的基因

    本文利用多头绒泡菌(Physarum， poly-cephalun)的两个蛋白肉桂醇脱氢酶PCAD (Gen-Bank登陆号：KF861979.1)和PSR蛋白(GenBank登陆号：FJ917746)对pYD-T的功能进行验证。使用引物TCADP1、CAD-CFPP2和CFPP3通过重叠PCR将PCAD与青色荧光蛋白eCFP的两个基因连接构成融合基冈PCAD- CFP。另外使用引物pSR -TPl .pSR -DsRedP2和DsRedP3通过重叠PCR将PSR和红色荧光蛋门DsRed两个基因连接构成融合基因PSR-DsRed，以上两个融合基因基因片段3’端均引入一个BamH I酶切位点。

    将pYD-T载体用限制性内切酶Xcm l酶切处理，经琼脂糖凝胶电泳后回收载体部分，得到两端带有突同T的线性化T载体，分别连接PCAD-CFP和P.SR-D.s Red，获得的重绀载体分别命名为pYD-PSR-DsRed和pY D—PCAD一CFP，融合蛋白表面展示示意图见图2。将连接好的重组载体转入大肠杆菌JM107感受态细胞中，涂板37℃培养过夜。挑取长势良好的单菌落接种于LB液体培养基中培养，提取质粒DNA进行酶节鉴定。

    1.2.4 酵母表面展示T载体pYD-T表达功能验证

    将pYD -PSR-DsRed和pYD - PCAD一CFP重组载体分别转化至酿酒酵母感受态细胞中 ......