1.2.5 实时定量PCR检测(quantitative real timePCR. QRT-PCR)

    转染36 h后，为检测CEACAM1基因沉默结果，提取各组电穿孔细胞RNA，反转录后进行QRT-PCR，采用△△CT法计算，比较各组细胞mRNA变化扩增条件：95℃预热30s，95℃变性5 s，60 ℃复性20s，40个循环CEACAM1引物如下：5’-GACCACTCCAATGACCCACC-3’和5’-GGGAGGCTGAAGTTGGTTGT-3’。β-actin作为内参基因(引物同上)。每组细胞均设3个复孔，结果取平均值。

    1.2.6

    WeSten-blot检测CEACAM1蛋白表达

    转染48 h后，为检测CEACAMl蛋白表达下调结果，提取各组电穿孔细胞膜蛋白。蛋白定量后，进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后将分离的蛋白质条带转移到硝酸纤维素膜上。封闭，洗膜，与一抗、二抗孵育，用ECL化学发光试剂显色成像。一抗分别为兔抗人pan-CEACAM多抗、小鼠β-actin单抗，二抗为羊抗兔二抗及羊抗鼠二抗。

    1.2.7 CCK-8法测定细胞增殖

    为检测CEACAM1抑制后对白血病B细胞增殖的影响 ......