用PCR的方法从T40质粒上分段扩增目的基因。PCR所用引物见表1，引物5'端加上了酶切位点和保护碱基，以便用于进行基因克隆(其中pUAST-taul-44的质粒由周洵提供)。

    按产品说明书配制PCR反应液(组分详见产品说明书)，并且按产品说明书方法设置PCR反应参数，如下：

    1. 95℃，4 min

    2. 95℃，0.5 min

    3. 58℃，0.5 min

    重复30个循环、4. 72℃，1 min/kb

    5. 72℃，10 min

    6. 24℃，Hold

    PCR反应结束后，用PCR同收试剂盒对PCR产物进行回收，并对PCR产物进行双酶切回收，使用T4 DNA连接酶将扩增片段克隆至载体pUAST中，再用热激法将连接后的重组质粒转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，过夜培养，挑取菌落，提取质粒酶切鉴定并送公司测序。1.2.2显微注射

    配制显微注射液(20 μL)：4×Injection Buffer5 μL；Helper DNA(△2-3) ......