利用三引物PCR法筛选纯合体，RT-PCR分别对拟南芥突变体(nac055nac072、nac019nac072、nac019nac055和nac019nac055nac072)纯合子进行基因表达鉴定。所用的特异性引物组合为：N019-ORF-F和N019-ORF-R，LBal和N019-ORF-R，N055-ORF-F和N055-ORF-R，N055-ORF-F和LBal，RD26-F和RD26-R，RD26-F和LBal(表2)；PCR程序：94℃变性5min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸70s(有LBal时：70s；若全长R+F：1 min 40 s)，38个循环，72℃延伸10min：1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。1.2.4基因表达检测按照文献[8]方法从Col和纯合文变体植株提取总RNA。用TaKaRa RTase M-MLV反转录合成cDNA，参考TaKaRa公司RTase M-MLV反转录试剂使用说明，利用特异引物(表2)，通过PCR和DNA凝胶电泳检测相应的cDNA。1.2.5种子绿胚统计种子经常规消毒后，分别点种在含有0.05、1、2μmol/L ......