1.2.4重组腺病毒的纯化及滴度测定

    Ad-GFP-C197和Ad-GFP在HEK293细胞中扩增后，氯化铯密度梯度离心法纯化病毒；最后转入透析袋，4 0C透析过夜[13]后分装保存，分别取一管用绿色荧光蛋白标记法[14]检测病毒滴度。

    1.2.5 C197蛋白在Hela细胞中的表达

    Hela细胞接种于6孔板(每孔2xl05个细胞)，分别将Ad-GFP-C197和Ad-GFP (MOI=100)转染Hela细胞48 h，提取6孔板中细胞的总蛋白行免疫印迹实验。

    1.2.6 Ad-GFP-C197对Hela细胞凋亡及增殖的影响

    收集Ad-GFP-C197和Ad—GFP转染24 h、48 h和72 h的Hela细胞，按照Annexin V-PE凋亡试剂盒说明书处理样品后上流式细胞仪进行检测并收集数据，根据早期凋亡细胞占活细胞数的比例来计算凋亡率并进行统计；同时将Hela细胞铺于24孔板中(每孔lxl04个)，共7块板，每组实验6个复孔。用Ad-GFP-C197和Ad-GFP分别感染各组细胞，每天取1块板进行实验，用胰酶消化各组细胞，采用台盼兰计数法对活细胞进行计数，并绘制细胞增殖曲线图。

    1.2.7 TRAP法检测Hela细胞的端粒酶活性

    收集Ad-GFP-C197转染24 h、48 h和72 h后的Hela细胞 ......