MLPA快速产前诊断染色体病需综合分析以缓解孕妇焦虑情绪(2)
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参见附件。
1.3羊水染色体培养按常规步骤进行。
2结果
2.1羊水MLPA-P095检测结果与羊水细胞培养核型分析结果比较如表1所示。4例羊水培养核型分析异常的病例包括3例21三体综合征和1例47，XXX综合征，采用MLPA方法均得到了准确的诊断。2例混有较明显母血污染的标本MLPA检测结果为47，XXY，但核型分析结果为46，XY。若排除母血污染的标本，MLPA和细胞培养核型分析的符合率达到100%。
表1MLPA与核型分析结果比较
2.2MLPA-P095检测结果为单独峰值异常的标本中选择7例进行了父母双方的外周血MLPA-P095检测，并将结果与羊水MLPA结果比较。结果如表2所示：13、18、21、X染色体上均出现单独发生片段拷贝数变异的位点。同时与父母做对比的结果显示在父母双方中至少有一方与胎儿的MLPA检测结果相一致。由于父母双方均未表现出临床症状，因此估计上述位点异常不导致微缺失或微重复综合征。经解释说明后孕妇表示理解，紧张和焦虑得到有效缓解。
3讨论
MLPA技术因其快速、低成本、高通量等优点在检测基因组拷贝数变化中显示出了良好的应用价值。其原理是针对染色体上的特定序列设计若干对探针, 每对探针的末端为共有的一段序列。当两条探针与目标基因完全配对杂交后, 再通过连接酶将其连接, 从而形成一条可供扩增的完整杂交探针，然后通过一对和共有序列一致的通用引物进行 PCR扩增,并通过毛细管电泳进行分离和定量。这样就可以将片段之间拷贝数的不同转化为毛细管电泳峰面积的不同和进行半定量分析[3]。我们用 MLPA技术检测对300余例羊水标本进行检测,结果显示假如剔除羊水混血等标本，MLPA技术与常规染色体培养核型分析对于普通的非整倍体诊断符合率达到100%。而MLPA相比传统的培养方法所需时间从2-3周显著缩短到2至3天，可以有效缓解唐筛高危孕妇的紧张焦虑情绪。
MLPA作为快速检测染色体非整倍体情况的技术手段具有快速、便捷、准确等特点，因此在国外得到较为广泛的应用。但是由于检测探针仅为40-50个碱基的长度，如果该片段发生缺失、重复或者突变，均有可能导致杂交结果的异常，最终影响对结果的分析[4]。因此在P095试剂盒中每条染色体分别提供了多个探针以便综合分析。本研究发现多个P095检测出现单独某个峰值出现偏高或偏低的羊水标本，但是仅凭此判断存在染色体的部分缺失或重复存在风险。经过对羊水标本和亲代外周血标本进行MLPA结果比较，在7例病例中都能够发现相同的位点的峰值变化。考虑其染色体即使存在部分重复或部分缺失亦可能为人群特有的多态性现象，并不会致病。本研究中发现的可能存在结果误读的探针片段涉及13、18、21、X染色体的多个片段，分析其原因可能是国外试剂盒在研发中采用的人群多态性数据库或者筛查的样本多集中在白种人，并没有对足够的黄色人种进行测试[5]。同时本研究也发现在已发现的检测结果为染色体部分数目异常的样本通常仅存在单独位点的数量异常，如果综合所有位点进行分析，并不会影响判断，但是对于染色体部分缺失或重复则有可能存在误读，需要进一步采取其他方法进行验证。
总之，MLPA技术可以用于染色体非整倍体异常的快速产前诊断，但是由于人群多态性的关系，还需要对部分探针针对中国人群进行进一步优化和调整，否则可能在染色体部分缺失或重复的情况下出现误判。如出现单位点异常，有必要对胎儿亲代行MLPA分析。
参考文献
[1]Comparison of multiplex ligation-dependent probe amplification and karyotyping in prenatal diagnosis. Boormans EM, Birnie E, Oepkes D,et al.Obstet Gynecol.2010 Feb;115(2 Pt 1):297-303.
[2]Economic evaluation of multiplex ligation-dependent probe amplification and karyotyping in prenatal diagnosis:a cost-minimization analysis. Boormans EM,Birnie E,Hoffer MJ,et al Arch Gynecol Obstet.2011 May 19.
[3]Detection of chromosome aneuploidies in chorionic villus samples by multiplex ligation-dependent probe amplification ......
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