艾篙挥发油体内外抑菌作用的实验研究
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【摘要】目的:对艾篙挥发油进行体外抑菌作用和体内保护作用进行的实验研究,检测艾篙挥发油体内外抑菌效果。方法:并以红霉素为对照采用琼脂培养基(Mue-H inton)二倍稀释法对艾篙挥发油的最低抑菌浓度(MIC)检测;通过对感染小鼠进行试验性治疗来检测致死保护率。结果:艾篙挥发油对实验菌的MIC90值范围0.78-25μL/mL;对对金葡萄球菌感染小鼠致死保护率20%-50%,对绿脓杆菌感染小鼠死亡的保护率30%-40%,对大肠杆菌感染小鼠死亡的保护率20%-40%。结论:艾篙挥发油体外对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌具有抑菌作用,其抑菌作用优于或等同于红霉素;体内对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌感染 小鼠具有较好的保护作用。
【关键词】艾篙挥发油;最低抑菌浓度;体外抑菌;体内保护
【中图分类号】R-3【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)10-042-2
菊科多年生植物艾篙Artemisiaar gyile vel.et Vant.的干燥叶作为中草药,可以就地取材,有较高的药用价值和悠久的应用历史。传统药性理论认为艾篙具有理气血、逐寒湿、温经血、安胎、杀虫止痒等作用。现代医学的药理研究表明,艾篙挥发油是一种广谱的抗菌抗病毒药物,它对细菌和病毒具有抑制和杀伤作用,对呼吸系统疾病有一定的防治作用。艾篙味芳香、苦燥辛散,能理气血、温经脉、逐寒湿、止冷痛,为妇科良药。可用于治疗院腹冷痛,经寒不调,宫冷不孕等症;炒炭止血,可用于治疗虚寒性月经过多,崩漏带下,妊娠胎漏;艾篙捣绒,制成艾条、艾柱,外灸能散寒止痛,温煦气血;煎汤外洗可治湿疮疥癣,祛湿止痒。艾篙化学成分含挥发油0.45%-1.00%,是艾篙抗菌作用的重要成分。油中主要为:一松油醇、8-按叶精、α一侧柏酮(α- thujone)、α一水芹烯(α-pHellandrene),β-T香烯(β-caryopHyllene),茨烯、樟脑、藏茵香酮、反式苇醇(transcarveol)。为了将艾篙更方便、科学地应用于临床,我们提取艾篙挥发油,进行了体外抑菌作用和体内保护作用的研究。
1实验材料
1.1药物
艾篙购于安徽中医学院第一附属医院药房;红霉素片,石药集团欧意药业有限公司出品,批号50404010。
1.2菌种
金黄色葡萄球菌10株(含标准菌株ATCC25923)、大肠杆菌10株(含标准菌株ATCC25922)、绿脓杆菌10株,由本院微生物教研室提供。
1.3培养基
琼脂培养基(Mue-H inton),上海东海医化试剂公司生产,批号0010320。
1.4动物
昆明种小鼠,体重(20士2)g,清洁级,安徽医科大学动物中心提供。
1.5艾篙挥发油制备
取艾篙适量,装入5000mL的蒸溜瓶中,加水浸泡1h ,加水量不得超过3500mL。按《中国药典》2000版(一部)附录XD水蒸气蒸馏法提取挥发油。馏出物含有少量水。加氯化钠少许,置冰箱冷藏24h,使水、油两相分层,再用分液滤斗进行分离,滤得绿色透明的、具有浓郁芳香气味的液体,即艾篙挥发油。
2方法与结果
2.1体外抑菌作用
2.1.1供试菌液的制备将各供试菌种分别接种于供试培养基中,37℃培养24h,选用标准菌落接种于液体培养基中培养6h,调整菌液浓度为108CFU/mL,备用。
2.1.2含药物培养基的制备将试验品及对照品分别加入培养基中做2倍稀释,艾篙挥发油(μL/ml)和红霉素(μg/mL)最终浓度依次为200,100,50,25,12.5, 6.25,3.12,1.56,0.78,同时设空白对照。
2.1.3供试菌接种用接种环分别取供试菌液一环(含菌量约为104 CFU),分别接种于含艾篙挥发油的培养基上和含红霉素的培养基上,37℃培养24h,观察试验结果。艾篙挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌有显著的抑菌作用;其抑制金黄色葡萄球菌的效果等同于红霉素,抑制大肠杆菌、绿脓杆菌的效果大大优于红霉素。结果见表1。
表1 艾篙挥发油和红霉素对实验菌MIC测定结果物(N=10)
实验组MIC红霉素(μg/mL)艾篙挥发油(μL/mL)
大肠杆菌MIC5012.500.78
MIC902000.78
金黄色葡萄球菌MIC500.780.78
MIC900.780.78
绿脓球菌MIC501000.312
MIC9010025
注:MIC50,MIC90分别为抑制50%,90%所试菌株的MIC值
2.2体内保护试验
2.2.1菌液及药液稀释将3种菌的原菌液用5%高活性干酵母液稀释(增强细菌的毒力)至所需浓度,测出试验菌株的100%最小致死量(MLD)。药液以2%吐温-80为溶剂,艾篙挥发油稀释浓度为120,80,40μg/mL3种溶液。
表2 艾篙挥发油对金葡萄球菌感染小鼠死亡的保护作用
组别剂量感染菌量死亡数死亡率(%)死亡保护率(%)
Ml/(kg.d)MLD/CFU
治疗组67.5×10855050★★
47.5×10855050★★
27.5×10888020★★
对照组7.5×108101000
注:与对照组比较,**P<0.01
2.2.2对感染动物保护试验选健康小鼠40只,随机分为3个药物治疗组和1个溶剂对照组,每组10只。以上各组分别腹腔注射0.5mL含1个MLD菌量致小鼠感染,治疗组腹腔注射0.5ml,3种浓度艾篙挥发油,对照组腹腔注射0.5mL 2%吐温-80。各组小鼠每天注射2次,连续用药3d,继续观察至5d。记录感染后5d内各组小鼠的存活数和死亡数,计算死亡保护率,进行X2检验。死亡保护率(%)=(对照组死亡率一药物组死亡率)×100%。结果见表2—表4
表3 艾篙挥发油对绿脓杆菌感染小鼠死亡的保护作用
组别剂量感染菌量死亡数死亡率(%)死亡保护率(%)
ML/(kg.d)MLD/CFU
治疗组64×10966040★★
44×10977030★★
24×10977030★★
对照组4×109101000
注:与对照组比较,**P<0.01
表4 艾篙挥发油对大肠杆菌感染小鼠死亡的保护作用
组别剂量感染菌量死亡数死亡率(%)死亡保护率(%)
ML/(kg.d)MLD/CFU
治疗组62×10966040★★
42×10988020★★
22×109101000★★
对照组2×109101000
3讨论
在体外抑菌实验中,我们采用Mue-H inton琼脂培养基是因为Mue-H inton琼脂对中药抑制作用的检测灵敏度高,比传统使用的营养琼脂抑菌效果提高2-16倍。在考察药物对体内感染动物保护作用的很多文献中,大部分采用单一的动物模型,但本实验采用3种动物模型进行试验,以便更好地考察艾篙挥发油对体内感染动物保护作用 ......
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