二妙散对类风湿关节炎大鼠抗炎免疫效果研究
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2010年9月1日
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【摘要】目的:研究二妙散对类风湿性关节炎的抗炎免疫作用,并探讨其作用机理。方法:以CIA大鼠为模型,观察关节组织病理学改变;血清抗Ⅱ型胶原抗体IgG和IgM水平,血清和关节组织中IL-6 IL-1β和TNF-a的活性。结果:与模型组比较,二妙散治疗组显著抑制了CIA大鼠骨关节组织的病理学改变,降低了血清中IgM和IgG的含量,抑制了血清和关节组织中IL-6 IL-1β和TNF-a的活性。结论:二妙散对CIA大鼠的抗炎免疫效果明显。
【关键词】CIA大鼠;二妙散;病理改变;细胞因子
【中图分类号】R-332【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)18-024-1
二妙散,由苍术、黄柏各等份组成,苍术苦温燥湿,黄柏苦寒、清热燥湿,两味合用,清热燥湿之力较强,是临床上治疗类风湿性关节炎的基础方。本文以与人类类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)临床特征最为接近的胶原诱导型关节炎(collagen II-induced arthritis,CIA)大鼠模型,从整体角度研究二妙散对CIA大鼠的抗炎免疫作用,并对其疗效机制进行初步的探讨。
1材料及方法
1.1材料
1.1.1动物及分组健康雄性Wistar大鼠,清洁级,体重(170±10)g。将大鼠随机分为3组,模型组、正常组、治疗组,每组12只。
1.1.2药品及试剂药品:二妙散水提液。试剂:牛Ⅱ型胶原;完全弗氏佐剂;IL-1β、TNF-α、IL-6放射免疫分析法测定试剂盒;兔抗鼠IgM抗体和IgG抗体。
1.1.3仪器放射免疫γ计数器;酶标仪。
1.1.4造模及给药除正常组外,其余2组按文献方法[1]制备CIA模型,造模后第7天开始灌胃给药,给药剂量为1g/kg/d,按1ml/100g体重给药,每天1次,连续4w,空白对照组和模型组灌服等容积蒸馏水。
1.2方法
1.2.1光镜下观察
组织病理学(HE染色)计分标准:具体方法参考文献[2]。
1.2.2酶联免疫吸附法检测血清抗CII抗体IgG、IgM含量,具体操作见说明书。
1.2.3细胞因子含量测定
采用放射免疫分析法:检测血清和关节组织匀浆中IL-6、IL-1β和TNF-a的含量,具体操作按试剂盒的说明进行。
1.2.4统计方法软件用SPSS15.0,实验结果以均数±标准差(-x±s)表示。
2结果
2.1二妙散对CIA大鼠血清抗CII抗体IgG、IgM含量的影响见表1。
2.2二妙散对CIA大鼠关节炎病理计分的影响见表2。
2.3二妙散对CIA大鼠血清和组织匀浆中细胞因子的影响见表3。
3讨论
RA是一种以关节和关节周围组织的非感染性炎症为主的全身性自身免疫性疾病。现代研究表明:二妙散水提取物进行提取分离,以Pc·DTH为指标的动物实验研究表明二妙散中黄柏碱和HB-1为免疫抑制作用的主要成分,且二妙散的醇不溶部位虽不含生物碱也有明显的免疫抑制活性[3]。
CIA模型是目前国际惯用的较理想的RA动物模型,其临床表现、病理学、免疫学改变和病理机制与人类RA相似。在本次实验所建立的CIA大鼠模型,观察发现大鼠普遍出现与RA相似的发病机理。免疫33天血清抗CII抗体IgG、IgM水平显著升高,炎症关节观察到滑膜组织、软骨及骨破坏严重。
IL-1β、TNF-α和IL-6是重要的促炎细胞因子,其在RA中所起的作用已越来越被了解。研究表明,IL-1β和TNF-α在RA炎症中起核心作用,介导了骨关节一系列的炎症反应。还参与调节滑膜成纤维细胞的增殖,与其它促炎细胞因子一起联合介导了RA炎症组织损伤。在本研究中,我们观察二妙散水提取物能明显抑制CIA大鼠血清的IL-1β、IL-6和TNF-α水平,对CIA大鼠血清升高的IL-6水平也有较好的抑制作用,推测这可能是二妙散水提取物抗RA的作用机理之一 ......
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