山茱萸果核果肉化学成分差异初探
【摘要】目的：研究山茱萸果核果肉化学成分的异同。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱：YWG C18(250mm × 4.6mm，5μm)；流动相：甲醇(A)- 0.1%磷酸水溶液(B)，梯度洗脱[0～60 min，A- B(15∶[KG-*2]85) →(50∶[KG-*2]50)]；流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃；检测波长：270 nm。结果：山茱萸果核果肉中共有的成分有5个，果核中特有的成分有18个，果肉中特有的成分有5个。结论：山茱萸果核果肉成分差异较大，二者不宜同用。
【关键词】山茱萸；果核；果肉；化学成分
【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2014)02-0015-02
《中华人民共和国药典》[1]2010年版规定山茱萸为山茱萸科植物山茱萸的干燥成熟果肉”。但山茱萸市场需求量大，供需矛盾尖锐，加工去核的劳动量大，加之部分的学者认为山茱萸可以与核同用[2]，造成市售山茱萸掺有15～85%的果核。究竟掺核山茱萸能否在临床使用，是否造成不良反应，临床病例报道不一，争论颇大[3]。为了进一步指导山茱萸的合理使用，本文采用HPLC-PDA技术对山茱萸果核果肉的中所含化学成分的异同进行初步研究。现报道如下：
, 百拇医药
1仪器与试药
Waters 600高效液相色谱仪，PDA检测器，Empower色谱工作站，KQ-50DB超声波清洗器(昆山超声波仪器有限公司)，METTLER-AE 240型电子分析天平(瑞士梅特勒公司)。山茱萸果核果肉采自河南省洛阳市嵩县罗庄村、河南省洛阳市栾川县十里坪和河南省南阳市西峡，经河南科技大学路西明教授鉴定为山茱萸科植物山茱萸的果核及其果肉。甲醇(色谱纯)，屈臣氏蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1供试品溶液的制备
2.1.1山茱萸果肉取干燥的山茱萸果肉5g，精密称定，用50%乙醇回流提取3次，每次1h，溶剂用量50mL，趁热过滤，合并滤液，减压浓缩，将其定量转移至100mL容量瓶，并用50%乙醇定容置至刻度，摇匀，待用。取上述溶液1.0mL，稀释至50mL，经0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。
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2.1.2山茱萸果核取适当粉碎的山茱萸果核5g，其余操作同“2.1.1”项下山茱萸果肉样品的制备方法。
2.2色谱条件YWG C18色谱柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇(A) - 0.1%磷酸水溶液(B)，梯度洗脱 [0～60 min，A- B(15：85) →(50：50)]；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30℃；检测波长：270nm；进样量：20μL。
2.3稳定性实验取洛阳嵩县罗庄村山茱萸果核果肉适量，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10 h进样，记录指纹图谱。结果表明，山茱萸果核果肉成分的各主要色谱峰相对保留时间和相对峰面积比值无明显变化，RSD分别为1.10～2.07%、1.05～1.89%。说明供试品溶液在10小时之内稳定。
2.4精密度实验取洛阳嵩县罗庄村山茱萸果核果肉适量，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液，重复进样6次，记录指纹图谱。结果表明，山茱萸果核果肉成分的各主要色谱峰相对保留时间和相对峰面积比值无明显变化，RSD分别为0.50～1.21%、0.22～0.87%。说明仪器精密度良好。
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2.5重复性实验取洛阳嵩县罗庄村山茱萸果核果肉适量，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液6份，记录色谱图。结果表明，山茱萸果核果肉成分的各主要色谱峰相对保留时间和相对峰面积比值的RSD为1.55～2.14%、1.30～1.98%。说明重复性良好。
2.6样品测定取不同产地的山茱萸果核果肉(河南省洛阳市嵩县罗庄村、河南省洛阳市栾川县十里坪和河南省南阳市西峡)，参照“2.1”项下方法制备山茱萸果核果肉供试品溶液，并按照“2.2”项下色谱方法记录指纹图谱。样品典型的HPLC指纹图谱见图1。
2.7果核、果肉成分比较对比不同产地的山茱萸果核果肉HPLC指纹图谱，并结合相应色谱峰的紫外光谱，发现果核果肉中的成分存在较大的差异，具体结果见表1
3讨论
3.1通过比较山茱萸果核果肉在225、270、300、330nm波长下各样品的HPLC指纹图谱，结果显示270nm波长下各供试品图谱中色谱峰的数目较多，基线漂移较小，故确定色谱条件的检测波长为270nm。
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3.2建立HPLC指纹图谱时考察的洗脱条件有：A[0～30 min，甲醇-0.1%磷酸水溶液 (50∶[KG-*2]50) →(100∶[KG-*2]0)]、B[0～30～50 min，甲醇-0.1%磷酸水溶液(10∶[KG-*2]90) → (50∶[KG-*2]50) →(100∶[KG-*2]0)]、C[0～50～55 min，甲醇-0.1%磷酸水溶液(15∶[KG-*2]85) → (60∶[KG-*2]40) →(100∶[KG-*2]0)]、D[0～60 min，甲醇-0.1%磷酸水溶液 (15：85) →(50：50)]。通过比较上述条件下各样品的HPLC图谱，发现在洗脱条件D下，样品中各色谱峰的分离度较好。
3.3根据各色谱峰的PDA光谱可知：果核特有的成分可分为两类，即保留时间在20.202、22.385min的成分，其最大吸收波长在220、260nm，和保留时间在4.950、6.210、8.190、11.262、12.000、13.911、16.842、19.002、20.202、22.385、23.215、24.285、29.001、30.192、30.999、33.211、45.322、46.680min的成分，其最大吸收波长在220、275nm，其典型的紫外吸收光谱图分别为图2中的A和B。果肉中特有的成分可分为两类，即保留时间在24.258、30.999min的成分，其最大吸收波长在240nm，和保留时间在3.988、20.000、53.951min的成分，其典型的紫外吸收光谱图分别为图2中的C和B。果核果肉共有的成分的典型的紫外吸收光谱图分别为图2中的B。据文献[4、5]推测紫外光谱A、B代表没食子酸类相关化合物，C代表马钱苷、莫诺苷等环烯醚萜类化合物。
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3.4研究结果表明山茱萸果核果肉中的成分存在较大的差异，果核中所含的成分远多于果肉中的成分，且其中的成分以没食子酸类相关化合物为主。基于此，本文认为山茱萸一定要去核使用。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010.
[2]彭勃，季玉荣.山茱萸果核与果肉化学成份的对比分[J].河南中医药学刊，1999，14(2)：13-14.
[3]张振凌，赵建颖，李娟山，等.茱萸去核的作用和方法研究[J].中药材，2006，29(1)：60-63.
[4]李小娜，霍长虹，殷玮，等.山茱萸中马钱苷和莫诺苷对照品的制备[J].中草药，2006，37(8)：1168-1170.
[5]帕丽达·阿不力孜，张丽静，热娜·卡斯木，等.高效液相色谱法测定新疆石榴皮中没食子酸的含量[J].时珍国医国药，2007，18(10)：2455-2456.
(收稿日期：2013.12.05), 百拇医药(董海鹏 李军 姜华 等)
【关键词】山茱萸；果核；果肉；化学成分
【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2014)02-0015-02
《中华人民共和国药典》[1]2010年版规定山茱萸为山茱萸科植物山茱萸的干燥成熟果肉”。但山茱萸市场需求量大，供需矛盾尖锐，加工去核的劳动量大，加之部分的学者认为山茱萸可以与核同用[2]，造成市售山茱萸掺有15～85%的果核。究竟掺核山茱萸能否在临床使用，是否造成不良反应，临床病例报道不一，争论颇大[3]。为了进一步指导山茱萸的合理使用，本文采用HPLC-PDA技术对山茱萸果核果肉的中所含化学成分的异同进行初步研究。现报道如下：
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1仪器与试药
Waters 600高效液相色谱仪，PDA检测器，Empower色谱工作站，KQ-50DB超声波清洗器(昆山超声波仪器有限公司)，METTLER-AE 240型电子分析天平(瑞士梅特勒公司)。山茱萸果核果肉采自河南省洛阳市嵩县罗庄村、河南省洛阳市栾川县十里坪和河南省南阳市西峡，经河南科技大学路西明教授鉴定为山茱萸科植物山茱萸的果核及其果肉。甲醇(色谱纯)，屈臣氏蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1供试品溶液的制备
2.1.1山茱萸果肉取干燥的山茱萸果肉5g，精密称定，用50%乙醇回流提取3次，每次1h，溶剂用量50mL，趁热过滤，合并滤液，减压浓缩，将其定量转移至100mL容量瓶，并用50%乙醇定容置至刻度，摇匀，待用。取上述溶液1.0mL，稀释至50mL，经0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。
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2.1.2山茱萸果核取适当粉碎的山茱萸果核5g，其余操作同“2.1.1”项下山茱萸果肉样品的制备方法。
2.2色谱条件YWG C18色谱柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇(A) - 0.1%磷酸水溶液(B)，梯度洗脱 [0～60 min，A- B(15：85) →(50：50)]；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30℃；检测波长：270nm；进样量：20μL。
2.3稳定性实验取洛阳嵩县罗庄村山茱萸果核果肉适量，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10 h进样，记录指纹图谱。结果表明，山茱萸果核果肉成分的各主要色谱峰相对保留时间和相对峰面积比值无明显变化，RSD分别为1.10～2.07%、1.05～1.89%。说明供试品溶液在10小时之内稳定。
2.4精密度实验取洛阳嵩县罗庄村山茱萸果核果肉适量，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液，重复进样6次，记录指纹图谱。结果表明，山茱萸果核果肉成分的各主要色谱峰相对保留时间和相对峰面积比值无明显变化，RSD分别为0.50～1.21%、0.22～0.87%。说明仪器精密度良好。
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2.5重复性实验取洛阳嵩县罗庄村山茱萸果核果肉适量，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液6份，记录色谱图。结果表明，山茱萸果核果肉成分的各主要色谱峰相对保留时间和相对峰面积比值的RSD为1.55～2.14%、1.30～1.98%。说明重复性良好。
2.6样品测定取不同产地的山茱萸果核果肉(河南省洛阳市嵩县罗庄村、河南省洛阳市栾川县十里坪和河南省南阳市西峡)，参照“2.1”项下方法制备山茱萸果核果肉供试品溶液，并按照“2.2”项下色谱方法记录指纹图谱。样品典型的HPLC指纹图谱见图1。
2.7果核、果肉成分比较对比不同产地的山茱萸果核果肉HPLC指纹图谱，并结合相应色谱峰的紫外光谱，发现果核果肉中的成分存在较大的差异，具体结果见表1
3讨论
3.1通过比较山茱萸果核果肉在225、270、300、330nm波长下各样品的HPLC指纹图谱，结果显示270nm波长下各供试品图谱中色谱峰的数目较多，基线漂移较小，故确定色谱条件的检测波长为270nm。
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3.2建立HPLC指纹图谱时考察的洗脱条件有：A[0～30 min，甲醇-0.1%磷酸水溶液 (50∶[KG-*2]50) →(100∶[KG-*2]0)]、B[0～30～50 min，甲醇-0.1%磷酸水溶液(10∶[KG-*2]90) → (50∶[KG-*2]50) →(100∶[KG-*2]0)]、C[0～50～55 min，甲醇-0.1%磷酸水溶液(15∶[KG-*2]85) → (60∶[KG-*2]40) →(100∶[KG-*2]0)]、D[0～60 min，甲醇-0.1%磷酸水溶液 (15：85) →(50：50)]。通过比较上述条件下各样品的HPLC图谱，发现在洗脱条件D下，样品中各色谱峰的分离度较好。
3.3根据各色谱峰的PDA光谱可知：果核特有的成分可分为两类，即保留时间在20.202、22.385min的成分，其最大吸收波长在220、260nm，和保留时间在4.950、6.210、8.190、11.262、12.000、13.911、16.842、19.002、20.202、22.385、23.215、24.285、29.001、30.192、30.999、33.211、45.322、46.680min的成分，其最大吸收波长在220、275nm，其典型的紫外吸收光谱图分别为图2中的A和B。果肉中特有的成分可分为两类，即保留时间在24.258、30.999min的成分，其最大吸收波长在240nm，和保留时间在3.988、20.000、53.951min的成分，其典型的紫外吸收光谱图分别为图2中的C和B。果核果肉共有的成分的典型的紫外吸收光谱图分别为图2中的B。据文献[4、5]推测紫外光谱A、B代表没食子酸类相关化合物，C代表马钱苷、莫诺苷等环烯醚萜类化合物。
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3.4研究结果表明山茱萸果核果肉中的成分存在较大的差异，果核中所含的成分远多于果肉中的成分，且其中的成分以没食子酸类相关化合物为主。基于此，本文认为山茱萸一定要去核使用。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010.
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[4]李小娜，霍长虹，殷玮，等.山茱萸中马钱苷和莫诺苷对照品的制备[J].中草药，2006，37(8)：1168-1170.
[5]帕丽达·阿不力孜，张丽静，热娜·卡斯木，等.高效液相色谱法测定新疆石榴皮中没食子酸的含量[J].时珍国医国药，2007，18(10)：2455-2456.
(收稿日期：2013.12.05), 百拇医药(董海鹏 李军 姜华 等)