焦磷酸测序鉴定建泽泻方法的建立(2)
2.4 测序验证 中药材DNA条形码鉴定系统中查询所得ITS2序列上游引物:5′-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3′,下游:5′-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3′。PCR扩增条件为94℃-5min;(94℃-30s,56℃-30s,72℃-45s)×30 cycle;72℃—10min;扩增产物于4℃保存。未经纯化的PCR产物送铂尚生物技术有限公司测序。3 结果与分析
3.1 焦磷酸测序结果 采用焦磷酸测序技术进行SNP分析。根据ITS2位点突变情况,得两种峰图,建泽泻(含须根、叶柄、叶片)突变位点碱基为A(如图1所示),川泽泻(含须根、叶柄、叶片)突变位点碱基为T(如图2所示),二者突变频率均不小于83%(见表2)。
3.2 测序验证结果 测序序列与下载序列见表3 ......
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