仙茅多糖对小鼠巨噬细胞吞噬活性的影响(2)
2.4细胞培养及处理将RAW264.7细胞和小鼠腹腔原代巨噬细胞接种于24孔板中,待细胞贴壁后,吸弃上清,分别加入含不同浓度仙茅多糖的DMEM培养基,使仙茅多糖浓度为500,250,125,62.5,31.25,0μg/mL,每组设3个平行孔,分别刺激36h。2.5巨噬细胞吞噬荧光标记大肠杆菌培养结束后,吸弃上清,预冷PBS洗2次,加入以双蒸水200倍稀释的荧光标记大肠杆菌溶液(1mL/孔),室温避光孵育1.5h。干预结束后,吸弃上清,台盼蓝染色5min,PBS洗5次,每次3min,加入4%多聚甲醛固定细胞。最后以DAPI染核5Smin,取出爬片盖于载玻片上,滴加抗荧光衰减封片剂并封片,于荧光倒置显微镜下观察。
2.6巨噬细胞吞噬百分率玻片于荧光倒置显微镜下观察200个细胞,记录吞噬荧光标记大肠杆菌的巨噬细胞数量;吞噬百分率(PP%)=200个巨噬细胞内吞噬荧光标记大肠杆菌的巨噬细胞数量/200个细胞巨噬细胞总数×100%。
2.7统计学分析应用SPSS16.0软件进行统计学分析,组间采用单因素方差分析进行显著性检验,以P<0.05为差异具有统计学意义。
3结果
3.1仙茅多糖对RAW264.7细胞吞噬作用的影响如图1所示 ......
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