HPLC法测定苦荞茶中芦丁的含量
曹树明 李 菊 胡炜彦 刘 旭 张荣平
摘要目的：建立苦荞茶中芦丁含量测定方法，测定苦荞茶中芦丁的含量；方法：HPLC法，C18反相柱(Dik-ma，C18，5μm，150x4.6mm)，流动相为n3%磷酸-甲醇(55:45)，检测波长358nm，流动相速度1.0ml/min，进样量20μl，柱温25℃；结果：芦丁的线性范围为0.048～0.16mg/ml，r=0.9995。苦荞茶中芦丁的含量为1.8%。
关键词 苦荞茶 HPLC 芦丁 含量测定
苦荞麦为蓼科植物苦荞麦Fagopyrum tataricum Gaertn.的干燥成熟种子，又称野荞麦、鞑靼荞、万年养、野南荞。主要分布于我国内蒙古、陕西、甘肃、宁夏、四川、云南等高寒地区，文献报道其有具有降血脂、拮抗血小板活化因子与受体结合、对甲型流感病毒的抑制、调节单纯性肥胖大鼠血糖和脂代谢紊乱、快速修复嘌吟脱核苷酸、抗氧化和对糖尿病肾病的防治等多种作用，其功效都与苦荞中生物类黄酮功效有关。苦荞茶为苦荞麦炒制而成的一种供茶饮的产品。本实验的目的在于测定苦荞茶中有效成分芦丁的含量，为保健食品质量检测和开发应用提供参考。
, 百拇医药
1 实验部分
1.1 仪器
高效液相色谱仪(DI-ONEX，680 HPLC Pump，紫外检测器UVD170U)，C18反相柱(Dikma，C18，5μm，150×4.6mm)，AS2060B型超声波仪；0.45μm微孔滤膜。
1.2 试剂
甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯化水，磷酸为分析纯。芦丁对照品(中国药品生物制品检定所提供，面积归一化法含量为99.4%)。苦荞茶(云南省昭通市高原红粮油购销有限责任公司提供)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Dikma C18柱(5μm，150×4.6mm)；流动相：0.3%磷酸-甲醇(55:45)；检测波长：358nm；洗脱相流速：1.0ml/min；柱温：25℃。
, 百拇医药
2.2 对照品溶液的制备
取芦丁对照品适量，置五氧化二磷干燥至恒重，精密称定，用甲醇定容于容量瓶中配制成浓度为2mg/ml的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
称取苦荞茶42.0g，置250ml圆底烧瓶中，用10倍量60%乙醇回流提取3次，合并提取液，减压回收溶剂，浓缩物用甲醇溶解定容于250ml容量瓶中，取该溶液2ml甲醇定容于25ml容量瓶中，为供试品溶液。
2.4 线性关系考察
精密吸取对照品溶液2.0，1.5，1.2，0.9，0.6ml分别置于25ml容量瓶中，用甲醇定容到刻度，摇匀。分别取以上溶液20μl进样测定。芦丁对照品峰面积(Y)与进样质量浓度(x)有良好的线性关系，回归方程：Y=0.6368X-0.4276，r=0.9995，线性范围为：0.048～0.16mg/ml。
, 百拇医药
2.5 精密度试验
精密量取100μg/ml溶液芦丁对照品溶液20μl注入高效液相色谱仪，连续进样5次，按上述条件测定峰面积，结果芦丁峰面积RSD为0.92%。
2.6 稳定性试验
取同一苦荞茶供试品溶液于0，2，4，6，8，12，24小时进样20μl进行测定，RSD为1.25%(n=7)，表明供试品溶液在24小时内稳定。
2.7 重现性试验
取同一批苦荞茶(批号：20061222)，按供试品溶液制备方法分别平行制备6份供试品溶液，进行测定，以外标法计算，结果芦丁的质量浓度为1.82%，RSD为1.84%。
2.8 加样回收率试验
, 百拇医药
精密量取苦荞茶供试品5份，每份5ml，分别精密加入100μg/ml芦丁对照品溶液5ml，制备供试品溶液，依法进行测定，结果芦丁的平均回收率为：99.2%～100.4%，RSD为1.52%(n=5)。
2.9 样品测定
将不同批号的苦荞茶样品制备成供试品溶液，分别进样20μl，纪录峰面积，按外标法计算。
3 讨论
苦荞茶中的芦丁含量可以直接进行测定，方法简单、可靠，重现性好。
苦荞茶中所特有的成分芦丁，能降低毛细血管通透性，改善微循环，加强维生素C的作用，并促进维生素C在体内蓄积，有利于改善脂质代谢，从而达到降血脂的作用。本苦荞茶中芦丁的含量测定法，样品处理简单、干扰少、准确度高、灵敏度好，对苦荞茶产品进行质量控制提供了有效的方法。
苦荞茶营养丰富，活性物质较多，而且主要生长在污染较少的西部地区。通过对苦荞麦的根、茎、叶等各个部分的活性成分的研究和分析，以及最佳工艺和先进技术的选择和使用，可提高苦荞麦的营养价值、使用价值和经济价值，有利于资源的开发利用，可作为绿色天然功能食品，改善人们的膳食结构，提高人们的生活水平。随着人们对苦荞麦研究和开发的深入，它的营养价值和药用价值会被了解得越来越清楚，苦荞麦产品将为丰富人们的物质文化生活以及高寒山区、民族地区人民的脱贫致富发挥重要的作用。, 百拇医药(曹树明等)
摘要目的：建立苦荞茶中芦丁含量测定方法，测定苦荞茶中芦丁的含量；方法：HPLC法，C18反相柱(Dik-ma，C18，5μm，150x4.6mm)，流动相为n3%磷酸-甲醇(55:45)，检测波长358nm，流动相速度1.0ml/min，进样量20μl，柱温25℃；结果：芦丁的线性范围为0.048～0.16mg/ml，r=0.9995。苦荞茶中芦丁的含量为1.8%。
关键词 苦荞茶 HPLC 芦丁 含量测定
苦荞麦为蓼科植物苦荞麦Fagopyrum tataricum Gaertn.的干燥成熟种子，又称野荞麦、鞑靼荞、万年养、野南荞。主要分布于我国内蒙古、陕西、甘肃、宁夏、四川、云南等高寒地区，文献报道其有具有降血脂、拮抗血小板活化因子与受体结合、对甲型流感病毒的抑制、调节单纯性肥胖大鼠血糖和脂代谢紊乱、快速修复嘌吟脱核苷酸、抗氧化和对糖尿病肾病的防治等多种作用，其功效都与苦荞中生物类黄酮功效有关。苦荞茶为苦荞麦炒制而成的一种供茶饮的产品。本实验的目的在于测定苦荞茶中有效成分芦丁的含量，为保健食品质量检测和开发应用提供参考。
, 百拇医药
1 实验部分
1.1 仪器
高效液相色谱仪(DI-ONEX，680 HPLC Pump，紫外检测器UVD170U)，C18反相柱(Dikma，C18，5μm，150×4.6mm)，AS2060B型超声波仪；0.45μm微孔滤膜。
1.2 试剂
甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯化水，磷酸为分析纯。芦丁对照品(中国药品生物制品检定所提供，面积归一化法含量为99.4%)。苦荞茶(云南省昭通市高原红粮油购销有限责任公司提供)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Dikma C18柱(5μm，150×4.6mm)；流动相：0.3%磷酸-甲醇(55:45)；检测波长：358nm；洗脱相流速：1.0ml/min；柱温：25℃。
, 百拇医药
2.2 对照品溶液的制备
取芦丁对照品适量，置五氧化二磷干燥至恒重，精密称定，用甲醇定容于容量瓶中配制成浓度为2mg/ml的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
称取苦荞茶42.0g，置250ml圆底烧瓶中，用10倍量60%乙醇回流提取3次，合并提取液，减压回收溶剂，浓缩物用甲醇溶解定容于250ml容量瓶中，取该溶液2ml甲醇定容于25ml容量瓶中，为供试品溶液。
2.4 线性关系考察
精密吸取对照品溶液2.0，1.5，1.2，0.9，0.6ml分别置于25ml容量瓶中，用甲醇定容到刻度，摇匀。分别取以上溶液20μl进样测定。芦丁对照品峰面积(Y)与进样质量浓度(x)有良好的线性关系，回归方程：Y=0.6368X-0.4276，r=0.9995，线性范围为：0.048～0.16mg/ml。
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2.5 精密度试验
精密量取100μg/ml溶液芦丁对照品溶液20μl注入高效液相色谱仪，连续进样5次，按上述条件测定峰面积，结果芦丁峰面积RSD为0.92%。
2.6 稳定性试验
取同一苦荞茶供试品溶液于0，2，4，6，8，12，24小时进样20μl进行测定，RSD为1.25%(n=7)，表明供试品溶液在24小时内稳定。
2.7 重现性试验
取同一批苦荞茶(批号：20061222)，按供试品溶液制备方法分别平行制备6份供试品溶液，进行测定，以外标法计算，结果芦丁的质量浓度为1.82%，RSD为1.84%。
2.8 加样回收率试验
, 百拇医药
精密量取苦荞茶供试品5份，每份5ml，分别精密加入100μg/ml芦丁对照品溶液5ml，制备供试品溶液，依法进行测定，结果芦丁的平均回收率为：99.2%～100.4%，RSD为1.52%(n=5)。
2.9 样品测定
将不同批号的苦荞茶样品制备成供试品溶液，分别进样20μl，纪录峰面积，按外标法计算。
3 讨论
苦荞茶中的芦丁含量可以直接进行测定，方法简单、可靠，重现性好。
苦荞茶中所特有的成分芦丁，能降低毛细血管通透性，改善微循环，加强维生素C的作用，并促进维生素C在体内蓄积，有利于改善脂质代谢，从而达到降血脂的作用。本苦荞茶中芦丁的含量测定法，样品处理简单、干扰少、准确度高、灵敏度好，对苦荞茶产品进行质量控制提供了有效的方法。
苦荞茶营养丰富，活性物质较多，而且主要生长在污染较少的西部地区。通过对苦荞麦的根、茎、叶等各个部分的活性成分的研究和分析，以及最佳工艺和先进技术的选择和使用，可提高苦荞麦的营养价值、使用价值和经济价值，有利于资源的开发利用，可作为绿色天然功能食品，改善人们的膳食结构，提高人们的生活水平。随着人们对苦荞麦研究和开发的深入，它的营养价值和药用价值会被了解得越来越清楚，苦荞麦产品将为丰富人们的物质文化生活以及高寒山区、民族地区人民的脱贫致富发挥重要的作用。, 百拇医药(曹树明等)