HPLC法测定清热凉血软膏中大黄素、大黄酚的含量(2)
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2.2.3 缺大黄阴性对照溶液的制备 取未加入大黄粉前的清凉膏中间体，按供试品溶液的制备方法制成缺大黄阴性对照品溶液。
2.3 前处理工艺的考察 分别考察加热回流和超声震荡两种提取方法，两者所测结果接近，加热回流法操作简便耗时长，超声提取耗时短对仪器操作要求较高;考察提取时间因素的影响，20min、30min、1h、2h提取后测定结果，其中30min处理后测定结果开始稳定;对同批样品以常温，加热，冰水浴冷却[1、2]进行提取处理，发现以冰水浴处理后含量测定明显高于其他方法，且结果重复性较好;本文参考《中国药典》2010版(一部)大黄药材测定的流动相体系[3]，在流动相中添加少量酸可以使色谱峰基线分离并峰形对称，考察了盐酸和硫酸并通过调整流动相的配比，使大黄素、大黄酚的分离度、拖尾因子等符合系统适应性试验的要求，最终确定最佳流动相为甲醇-0.1%磷酸(80∶20)，以2.5mol/l硫酸溶液为酸性添加剂[4]。
2.4 空白试验 取大黄素、大黄酚对照品溶液、清凉膏供试品溶液及缺大黄的阴性对照品溶液，在上述色谱条件下分别进样10μl(图1)。结果表明：对照品溶液和清凉膏供试品溶液色谱图在保留时间10、15min出现大黄素、大黄酚的色谱峰;缺大黄阴性对照品溶液色谱图在相同保留时间无色谱峰 ......
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