白花蛇舌草的体外抗肿瘤活性研究(1)
【摘 要】 目的：应用白花蛇舌草提取物进行体外结肠癌HT-29细胞株、结肠癌HCTI16细胞株的抑制实验，观察白花蛇舌草提取物的抗肿瘤活性。方法：通过体外培养的方法培养人结肠癌HT-29细胞株和结肠癌HCTI16细胞株，对比分析不同浓度白花蛇舌草提取物对细胞株的影响。结果：白花蛇舌草提取物对HT-29、HCTI16细胞株的影响为：3mg/ml浓度时抑制率分别为(25.64±1.36)%、(27.36±1.87)%；5mg/ml浓度时抑制率(37.25±2.01)%、(39.01±1.65)%；7mg/ml浓度时抑制率(49.87±1.68)%、(51.22±2.33)%，其抑制率均优于对照组(P<0.05)。结论：白花蛇舌草提取物可有效抑制结肠癌HT-29细胞株以及结肠癌HCTI16细胞株的增值，具有显著的抗肿瘤效果。
【关键词】 白花蛇舌草；提取物；结肠癌HT-29细胞株；结肠癌HCTI16细胞株；凋亡作用
【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2016)11-0007-01
肿瘤在患病人群中的致残率及致死率居高不下，是较为难治的一类疾病。西医对于肿瘤的治疗常采用切除手术治疗以及放化疗治疗等，但治疗费用昂贵，且对机体损害极大[1]。中医药及其提取物属于天然药材，具有极高的生物活性，且中药临床应用的不良反应相对较小。为了观察白花蛇舌草提取物的抗肿瘤活性，本研究通过体外实验的方法观察其对结肠癌HT-29细胞株以及结肠癌HCTI16细胞株的抑制率。
1 仪器与材料
1.1 仪器 低温离心机(SIGMA公司生产，型号2-16PK)、酶标仪(上海赛默飞世尔公司生产，型号MK3)、显微镜(日本尼康公司生产，型号ECLIPSE TS-100)。
1.2 材料 白花蛇舌草由医院药房提供。RPMI1640培养基(上海博生生物科技有限公司生产，LM-R1641/500)；噻唑蓝(MTT)干粉(北京索莱宝科技有限公司生产，M8180-1)；(上海国源生物技术有限公司，9002-07-7)、胎牛血清(上海玉博生物科技有限公司，16000-044)。结肠癌HT-29、HCTI16细胞株由本市医学科学院基础医学研究所赠。
2 方法
2.1 药液的制备 白花蛇舌草应用85%乙醇进行回流提取两次，过滤，回收乙醇，将过滤液浓缩至1.05的相对密度，然后进行喷雾干燥得白花蛇舌草粉末提取物。将提取物溶于40%DMSO中，制备成0.4g/ml的溶液，备用。
2.2 方法 在含有胎牛血清的RPMI1640培养基中分别加入结肠癌HT-29细胞株、结肠癌HCTI16细胞株，分别置于细胞培养箱中进行体外培养。培养后取对数生长期的结肠癌HT-29细胞株及结肠癌HCTI16细胞株，应用胰蛋白酶进行消化处理，制成细胞悬浮液进行细胞计数。将细胞悬液的细胞计数密度限定在1×105个/ml，分别加入0mg/ml、3mg/ml、5mg/ml、7mg/ml的白花蛇舌草溶液，于96孔培养板进行接种24h培养。再加入0.5mg/ml的MTT溶液37℃下进行4h的孵育，后加入DMSO进行混匀震荡。
2.3 指标的测定 室温下静置后进行吸光度值测定，计算不同浓度下的平均抑制率。结肠癌细胞株的抑制率=(对照组吸光度值-观察组吸光度值)/对照组吸光度值×100%。
2.4 统计学方法 数据采用SPSS18.0软件统计分析，计量资料用(x±s)表示，并用t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。
3 结果
由表1可知，不同浓度的白花蛇舌草提取物对结肠癌HT-29细胞株、结肠癌HCTI16细胞株的抑制率均显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。
4 讨论
肿瘤属于中医“积聚”的范畴，是由于机体受到外界邪毒入侵，体内正气亏虚，导致正亏邪实而诱发肿瘤的发生。肿瘤发生早期主要为风湿热毒邪入侵机体，导致机体邪实症状[2]。随着肿瘤的不断发生发展，机体正气耗损，从而出现较为显著的虚证症状。另外，饮食结构因素及自身情志失畅等，可使邪毒入侵所致的脏腑损伤以及气滞血瘀状态加重，导致肿瘤的不断进展。中药有效成分的提取分离在中药产业中得到广泛关注，通过药物有效成分的提取纯化，可在不同程度上提升药物的临床药效。
中药及其提取物在抗肿瘤的应用研究较为广泛，其作用机制复杂，主要体现在诱导癌细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成、诱导肿瘤细胞分化以及逆转肿瘤细胞耐药性等几个方面。目前，抗肿瘤治疗较为理想的机制即为诱导肿瘤细胞的凋亡[3]，而细胞凋亡的自我破坏机制由基因决定。中药及其提取物可使肿瘤细胞自身的基因受到直接性的损伤，从而使其处于病理状态。[JP+1]肿瘤细胞的周期性分裂受到阻碍，基因表达受到抑制，肿瘤细胞停止扩增，发生程序性凋亡，从而起到抗肿瘤的作用。另外，随着肿瘤的不断生长，其可刺激新生肿瘤血管的出现，并不断为肿瘤的生长提供营养供给。但肿瘤细胞内血管多未成熟，且其血管分支杂乱，极易发生破裂渗漏而为肿瘤的转移提供重要条件。
中药及其提取物可使肿瘤血管的VEGF等生成因子的信号传导途径受到抑制，从而阻碍肿瘤血管生成因子的表达，还可促使血小板因子4等肿瘤血管生成抑制因子的表达[4]。机体内肿瘤细胞存在异型性特征，从一定程度上证实肿瘤细胞存在不同阶段的分化现象，肿瘤干细胞是肿瘤细胞分化发生以及发展的源动力。中药及其提取物可促使肿瘤干细胞恢复正常调节分化机制，不断分化为正常细胞或者终末细胞，降低肿瘤细胞的恶性水平或使其自我更新能力丧失，从而达到抗肿瘤的效果。此外，多数肿瘤细胞存在不同程度的多重耐药性，降低了肿瘤化疗治疗的疗效。肿瘤多重耐药的主要因素为其P-糖蛋白的相关表达，中药及其
提取物可使P-糖蛋白在肿瘤细胞膜上的表达水平下调，从而使P-糖蛋白的活性受到抑制，降低肿瘤细胞的耐药性，提升化疗抗肿瘤的疗效[5]。, http://www.100md.com(邓凤芸)
【关键词】 白花蛇舌草；提取物；结肠癌HT-29细胞株；结肠癌HCTI16细胞株；凋亡作用
【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2016)11-0007-01
肿瘤在患病人群中的致残率及致死率居高不下，是较为难治的一类疾病。西医对于肿瘤的治疗常采用切除手术治疗以及放化疗治疗等，但治疗费用昂贵，且对机体损害极大[1]。中医药及其提取物属于天然药材，具有极高的生物活性，且中药临床应用的不良反应相对较小。为了观察白花蛇舌草提取物的抗肿瘤活性，本研究通过体外实验的方法观察其对结肠癌HT-29细胞株以及结肠癌HCTI16细胞株的抑制率。
1 仪器与材料
1.1 仪器 低温离心机(SIGMA公司生产，型号2-16PK)、酶标仪(上海赛默飞世尔公司生产，型号MK3)、显微镜(日本尼康公司生产，型号ECLIPSE TS-100)。
1.2 材料 白花蛇舌草由医院药房提供。RPMI1640培养基(上海博生生物科技有限公司生产，LM-R1641/500)；噻唑蓝(MTT)干粉(北京索莱宝科技有限公司生产，M8180-1)；(上海国源生物技术有限公司，9002-07-7)、胎牛血清(上海玉博生物科技有限公司，16000-044)。结肠癌HT-29、HCTI16细胞株由本市医学科学院基础医学研究所赠。
2 方法
2.1 药液的制备 白花蛇舌草应用85%乙醇进行回流提取两次，过滤，回收乙醇，将过滤液浓缩至1.05的相对密度，然后进行喷雾干燥得白花蛇舌草粉末提取物。将提取物溶于40%DMSO中，制备成0.4g/ml的溶液，备用。
2.2 方法 在含有胎牛血清的RPMI1640培养基中分别加入结肠癌HT-29细胞株、结肠癌HCTI16细胞株，分别置于细胞培养箱中进行体外培养。培养后取对数生长期的结肠癌HT-29细胞株及结肠癌HCTI16细胞株，应用胰蛋白酶进行消化处理，制成细胞悬浮液进行细胞计数。将细胞悬液的细胞计数密度限定在1×105个/ml，分别加入0mg/ml、3mg/ml、5mg/ml、7mg/ml的白花蛇舌草溶液，于96孔培养板进行接种24h培养。再加入0.5mg/ml的MTT溶液37℃下进行4h的孵育，后加入DMSO进行混匀震荡。
2.3 指标的测定 室温下静置后进行吸光度值测定，计算不同浓度下的平均抑制率。结肠癌细胞株的抑制率=(对照组吸光度值-观察组吸光度值)/对照组吸光度值×100%。
2.4 统计学方法 数据采用SPSS18.0软件统计分析，计量资料用(x±s)表示，并用t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。
3 结果
由表1可知，不同浓度的白花蛇舌草提取物对结肠癌HT-29细胞株、结肠癌HCTI16细胞株的抑制率均显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。
4 讨论
肿瘤属于中医“积聚”的范畴，是由于机体受到外界邪毒入侵，体内正气亏虚，导致正亏邪实而诱发肿瘤的发生。肿瘤发生早期主要为风湿热毒邪入侵机体，导致机体邪实症状[2]。随着肿瘤的不断发生发展，机体正气耗损，从而出现较为显著的虚证症状。另外，饮食结构因素及自身情志失畅等，可使邪毒入侵所致的脏腑损伤以及气滞血瘀状态加重，导致肿瘤的不断进展。中药有效成分的提取分离在中药产业中得到广泛关注，通过药物有效成分的提取纯化，可在不同程度上提升药物的临床药效。
中药及其提取物在抗肿瘤的应用研究较为广泛，其作用机制复杂，主要体现在诱导癌细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成、诱导肿瘤细胞分化以及逆转肿瘤细胞耐药性等几个方面。目前，抗肿瘤治疗较为理想的机制即为诱导肿瘤细胞的凋亡[3]，而细胞凋亡的自我破坏机制由基因决定。中药及其提取物可使肿瘤细胞自身的基因受到直接性的损伤，从而使其处于病理状态。[JP+1]肿瘤细胞的周期性分裂受到阻碍，基因表达受到抑制，肿瘤细胞停止扩增，发生程序性凋亡，从而起到抗肿瘤的作用。另外，随着肿瘤的不断生长，其可刺激新生肿瘤血管的出现，并不断为肿瘤的生长提供营养供给。但肿瘤细胞内血管多未成熟，且其血管分支杂乱，极易发生破裂渗漏而为肿瘤的转移提供重要条件。
中药及其提取物可使肿瘤血管的VEGF等生成因子的信号传导途径受到抑制，从而阻碍肿瘤血管生成因子的表达，还可促使血小板因子4等肿瘤血管生成抑制因子的表达[4]。机体内肿瘤细胞存在异型性特征，从一定程度上证实肿瘤细胞存在不同阶段的分化现象，肿瘤干细胞是肿瘤细胞分化发生以及发展的源动力。中药及其提取物可促使肿瘤干细胞恢复正常调节分化机制，不断分化为正常细胞或者终末细胞，降低肿瘤细胞的恶性水平或使其自我更新能力丧失，从而达到抗肿瘤的效果。此外，多数肿瘤细胞存在不同程度的多重耐药性，降低了肿瘤化疗治疗的疗效。肿瘤多重耐药的主要因素为其P-糖蛋白的相关表达，中药及其
提取物可使P-糖蛋白在肿瘤细胞膜上的表达水平下调，从而使P-糖蛋白的活性受到抑制，降低肿瘤细胞的耐药性，提升化疗抗肿瘤的疗效[5]。, http://www.100md.com(邓凤芸)