“珍珠—25”味丸对小鼠心脏组织VEGF基因mRNA的影响研究(2)
2 方法2.1 动物分组及给药 选取培养至第10-14d的BALB/c 小鼠,随机分为空白组(生理盐水)、蒙药“珍珠-25”味丸各剂量(低剂量100μM;中剂量200μM;高剂量500μM)组,2次/d,连续灌胃4周后把小鼠断颈处死,解剖取出心脏放入液氮保存。
2.2 TRIzol法RNA的提取 利用TRIzol法提取小鼠心脏的总RNA,为清除残留的基因组DNA,每个RNA 样本中加入10U DNaseⅠ(Takara,日本)37℃孵育30min。3个RNA 样本的浓度被测定后,每个样本各取10μg等量混合组成1个RNA 池(RNA pool,共30μg)。接着使用Oligotex mRNA Midi Kit(Qiagen,德国)分离纯化样品mRNA。整个流程RNA 的质量和含量通过使用Nanodrop ND-1000(LabTech,美国)检测吸光度 (A260/A280)进行测定, RNA 的完整性通过1.2%的凝胶电泳进行检测,然后-80℃保存备用。
2.2.1 RNA浓度测定 RNA浓度=(OD260-OD320)×稀释倍数×0.04μg/μL。OD230,260,280,320分别是盐浓度、核酸、蛋白质等有机物和背景(溶液混浊度)的吸光度值 ......
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