1.2.4 流式检测 调细胞浓度为4×105/mL，用人IgG(1μg/105)封闭Fc受体(室温，15min)。加入10μL荧光标记单抗(CD134(NKG2D)-FITC、CD337(NKp30)-PE、CD336(NKp44)-PerCP、CD335(NKp46)-APC)，4℃避光孵育30～45min。染色后的细胞用相同PBS缓冲液洗涤3次。细胞重悬于500μL含0.5%BSA的 PBS缓冲液中，流式细胞仪检测。

    1.2.5 NK92-MI细胞穿孔素、颗粒酶B蛋白表达的检测 细胞裂解液裂解细胞，超声处理10s，12000r/min离心5min，取上清液BCA法检测蛋白浓度。取25μg蛋白经10%SDS PAGE电泳分离蛋白，将目的蛋白转移至硝酸纤维素滤膜上，在5%脱脂奶粉的封闭液中室温下封闭2h，分别加入穿孔素和颗粒酶B一抗4℃过夜，洗膜后，加入二抗，37℃，lh。ECL发光，信号在图像分析系统中进行吸光度扫描。以β-actin作为内参，获得蛋白相对量。

    1.2.6 统计学分析 应用SPSS 13.0统计分析软件进行统计学分析，数据均以均数加减标准差(x[TX-*3]±SD)表示 ......