金复康优化方联合吉非替尼对非小细胞肺癌细胞H1975的影响及作用机制(3)
细胞存活率( %) = (给药组OD均值- 空白组OD值) /(对照组OD均值-OD空白组值) ×100%。2.4 划痕实验检测 联合用药对细胞迁移的影响收集处于对数生长期细胞,按每孔1×105个细胞接种6孔板,培养24h后弃上清液,实验设正常细胞对照组和不同药物实验组,用10μl枪头垂直划出划痕,实验孔分别加入无血清的RPMI1640培养对照组,ALG-X-012(1mg/mL)、吉非替尼(1μmol/L)以及两药联合(1mg/mL ALG-X-012与1μmol/L吉非替尼)培养基4mL。于0h、12h、24h在显微镜下拍照,得出划痕宽度与面积。
划痕面积=划痕长度×划痕宽度。
2.5 流式细胞术检测 联合用药对细胞凋亡的影响取对数生长期的细胞,按照每孔1×105个接种于6孔板中,按照空白组、ALG-X-012(1mg/mL)、吉非替尼(1μmol/L)、联合给药组(1mg/mL ALG-X-012与1μmol/L吉非替尼),继续培养24h,去除培养基,用PBS清洗3次,用胰酶消化细胞。用PBS清洗细胞两次,离心收集细胞,不少于1×105个细胞。加入500μL的Binding Buffer悬浮细胞,加入5μL Annexin V-APC混匀后 ......
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