ASE-CAD结合柱后补偿液相色谱法测定浙贝母中贝母素甲和贝母素乙(1)
【摘 要】 目的：建立一种通过快速溶剂萃取(ASE)提取，使用柱后补偿液相色谱结合电雾式检测器(CAD)测定浙贝母中贝母素甲和贝母素乙含量的方法，并将该方法与药典方法进行了差异分析。方法：通过试验确定ASE萃取最优条件：75%乙醇作为溶剂，萃取温度80 ℃，萃取时间3min，循环次数2次，HPLC方法为色谱柱：ACE Excel C18-AR(50×2.1mm，1.7μm)，分析泵流动相：乙腈-0.1%氨水(40∶60)，梯度程序：0min，40%A，1～5min，40%～60%A，5～6min 60%A，流速：0.3mL/min;补偿泵流动相：乙腈，流速：0.3mL/min。结果：贝母素甲、乙分别在29.4～588.4μg/mL和 28.4～569.0μg/mL范围内呈良好的线性，方法回收率分别为97.23%～100.90%和96.32%～98.75%，方法结果与药典方法结果吻合。结论：该方法快速、准确、通用性高、重现性好，可用于测定浙贝母中贝母素甲和贝母素乙的含量测定。
【关键词】 快速溶剂萃取;CAD;柱后补偿;贝母素甲;贝母素乙
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2019)3-0043-03
Abstract： Objective Oestablish A method was developed for the determination of peimine and peiminine in Bulbus Fritillariae Thunbergii by accelerated solvent extraction-high performance liquid chromatography(HPLC) tandem a charged aerosol detector (CAD) with post column compensation. Methods The method was developed using a C18-AR (50×2.1mm， 1.7μm ) column and a linear gradient elution. Acenitrile- 0.2%ammonia water was used as mobile phase. The flow rate was 0.3mL/min.The injection volume was 5μL and the column temperature was maintained at 40℃. CAD： nebulization temperature was 45℃. Results The linear ranges of peimine and peiminine were at 29.4～588.4μg/mL and 28.4～569.0μg/mL， the average recoveries were from 97.32%～100.90% and 96.2% to 98.75%.Conclusion The method is accurate， rapid and high sensitive， which can be used in the quantitative determination of peimine and peiminine in Bulbus Fritillariae Thunbergii.
Keywords： Accelerated Solvent Extraction; Post Column Compensation;CAD;Peimine;Peiminine
浙貝母为百合科植物浙贝母 Fritillaria thunbergii Miq.的干燥鳞茎，具有清热化痰止咳，解毒散结消痈的作用[1]。其有效成分主要为生物碱，其中又以贝母素甲和贝母素乙为主[2]。文献显示其含量测定主要是采用含有毒性大的三氯甲烷溶液提取，然后采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定[1-3]，此类方法较成熟但前处理普遍耗时较长。前处理使用的ASE是一种在高温高压条件下萃取样品中有机组分的新方法，其通过维持体系内的高压状态使得溶剂在高温条件下不汽化，具有自动化，提取效率高等特点。电雾式检测器(Charged Aerosol Detector，CAD)是在2004年才推出的一种较为新型的通用型检测器，其响应值不依赖于被测物质的光学性质和离子化效率能检测非挥发或很多半挥发性的物质。研究表明，与ELSD比较，CAD 具有更高的检测灵敏度[4-5]和更加均匀一致的响应因子[6]，在中药或天然药物中的皂苷或胆酸等缺少紫外发色团的成分分析中应用较多[7-8] 。柱后补偿(反梯度)即在色谱柱后进入检测器前加入另一分析溶剂，通过增加有机相比例，可以提高雾化效率，增加响应值，降低检出限，提高检测效果[9]。本研究采用快速溶剂萃取法提取浙贝母中贝母素甲和贝母素乙，并结合HPLC-CAD法进行分离测定。在实验中采用梯度洗脱与柱后补偿进行分析，进一步提高了贝母素甲和贝母素乙响应因子的一致性。本方法不仅操作简便、准确度高，而且ASE法提取时间仅为常规方法的1/8，能满足浙贝母中贝母素甲和贝母素乙的快速测定。
1 仪器与材料
1.1 仪器 XA205DU电子分析天平、ASE350快速溶剂萃取仪(美国赛默飞世尔科技有限公司)、Ultimate3000双三元高速液相色谱仪(含CAD检测器，美国赛默飞世尔科技有限公司)。
1.2 材料 对照品贝母素甲(批号：110750-201311，含量按97.3%计)、贝母素乙(批号：110751-201611，含量按96.4%计)均购自中国生物制品检定研究院;实验用药品均购自当地药房(浙贝母产地浙江，批号：1510111、150827、150618;产地江西，批号151102);水为纯化水，甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。, 百拇医药(廖强 陈勇)
【关键词】 快速溶剂萃取;CAD;柱后补偿;贝母素甲;贝母素乙
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2019)3-0043-03
Abstract： Objective Oestablish A method was developed for the determination of peimine and peiminine in Bulbus Fritillariae Thunbergii by accelerated solvent extraction-high performance liquid chromatography(HPLC) tandem a charged aerosol detector (CAD) with post column compensation. Methods The method was developed using a C18-AR (50×2.1mm， 1.7μm ) column and a linear gradient elution. Acenitrile- 0.2%ammonia water was used as mobile phase. The flow rate was 0.3mL/min.The injection volume was 5μL and the column temperature was maintained at 40℃. CAD： nebulization temperature was 45℃. Results The linear ranges of peimine and peiminine were at 29.4～588.4μg/mL and 28.4～569.0μg/mL， the average recoveries were from 97.32%～100.90% and 96.2% to 98.75%.Conclusion The method is accurate， rapid and high sensitive， which can be used in the quantitative determination of peimine and peiminine in Bulbus Fritillariae Thunbergii.
Keywords： Accelerated Solvent Extraction; Post Column Compensation;CAD;Peimine;Peiminine
浙貝母为百合科植物浙贝母 Fritillaria thunbergii Miq.的干燥鳞茎，具有清热化痰止咳，解毒散结消痈的作用[1]。其有效成分主要为生物碱，其中又以贝母素甲和贝母素乙为主[2]。文献显示其含量测定主要是采用含有毒性大的三氯甲烷溶液提取，然后采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定[1-3]，此类方法较成熟但前处理普遍耗时较长。前处理使用的ASE是一种在高温高压条件下萃取样品中有机组分的新方法，其通过维持体系内的高压状态使得溶剂在高温条件下不汽化，具有自动化，提取效率高等特点。电雾式检测器(Charged Aerosol Detector，CAD)是在2004年才推出的一种较为新型的通用型检测器，其响应值不依赖于被测物质的光学性质和离子化效率能检测非挥发或很多半挥发性的物质。研究表明，与ELSD比较，CAD 具有更高的检测灵敏度[4-5]和更加均匀一致的响应因子[6]，在中药或天然药物中的皂苷或胆酸等缺少紫外发色团的成分分析中应用较多[7-8] 。柱后补偿(反梯度)即在色谱柱后进入检测器前加入另一分析溶剂，通过增加有机相比例，可以提高雾化效率，增加响应值，降低检出限，提高检测效果[9]。本研究采用快速溶剂萃取法提取浙贝母中贝母素甲和贝母素乙，并结合HPLC-CAD法进行分离测定。在实验中采用梯度洗脱与柱后补偿进行分析，进一步提高了贝母素甲和贝母素乙响应因子的一致性。本方法不仅操作简便、准确度高，而且ASE法提取时间仅为常规方法的1/8，能满足浙贝母中贝母素甲和贝母素乙的快速测定。
1 仪器与材料
1.1 仪器 XA205DU电子分析天平、ASE350快速溶剂萃取仪(美国赛默飞世尔科技有限公司)、Ultimate3000双三元高速液相色谱仪(含CAD检测器，美国赛默飞世尔科技有限公司)。
1.2 材料 对照品贝母素甲(批号：110750-201311，含量按97.3%计)、贝母素乙(批号：110751-201611，含量按96.4%计)均购自中国生物制品检定研究院;实验用药品均购自当地药房(浙贝母产地浙江，批号：1510111、150827、150618;产地江西，批号151102);水为纯化水，甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。, 百拇医药(廖强 陈勇)