HPLC法测定去炎酊中游离大黄素和大黄酚的含量(2)
2.1.2 供试品溶液 精密量取已摇匀的去炎酊10mL,置25mL容量瓶中,用60%乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过,即得供试品溶液。2.1.3 阴性样品溶液 按处方比例及制法,制得不含大黄和虎杖的阴性样品。按“2.1.2”项下方法制成阴性样品溶液。
2.2 色谱条件 色谱柱:依利特C18柱(4.6mm×250mm,5μm),柱温为30 ℃;流动相:0.1%磷酸溶液-甲醇 (25∶75);流速为1.0mL/min;检测波长为254nm;进样量:10μL。
2.3 线性关系考察 分别精密吸取“2.1.1”项下的对照品储备液0.2、0.5、1.0、2.5、5.0mL分别置10mL容量瓶中, 加60%乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过,即得标准系列。分别取10μL进样,记录峰面积。以质量浓度(X)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标,进行线性回归,分别得大黄素和大黄酚回归方程为Y=36 418X-58 243,r=1.000 0(n=5)和Y=59 776X-39 442,r=1.000 0(n=5)。结果表明,大黄素和大黄酚的质量浓度在分别在8.460 4~211.510 0和3.523 7~88.091 5 μg/mL的范围内与对应峰面积呈良好的线性关系。混合对照品、供试品及阴性样品的色谱图如图1所示。
2.4 专属性试验 吸取“2.1”项下的3种溶液,在“2.2”项下的色谱条件测定,结果样品在与对照品保留时间相应位置上 ......
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