槐雅萍,杨永轩,贾子善,郭宗成,贾新凤

    本文要点

    1 探索学习大鼠脑梗死灶周围皮质巢蛋白阳性神经元数在造模后第7、14天明显多于手术对照组,提示探索学习可能通过增强脑梗死大鼠巢蛋白的表达,来保护神经元免受缺血缺氧损伤,促进脑功能的重组。

    2 除大脑室管膜下区、海马齿状回外,海马 CA1～4区、缺血灶周围皮质也可见巢蛋白的表达。推测脑缺血损伤可能刺激脑内成熟的间质细胞或星形胶质细胞返回到神经干细胞状态,重新分化成神经元。

    3 探索学习与突出素的表达呈正相关;大鼠经过探索学习训练,随着时间的延长,突出素的反应产物明显增多。

    中枢神经系统可塑性变化是康复治疗的机制之一。半个世纪前,就有学者提出神经皮质的连接可因个体的经历 (如学习、感觉刺激、物理刺激等)而发生改变,脑功能代表区的改变也是如此。探索学习是指动物主动去接受新的信息而改变自身行为、适应新环境的过程,是不断用新记忆取代旧记忆的过程[1],主要用来训练动物的学习、记忆、空间辨别、觅食等本能性行为能力,促进受损的行为学功能的恢复。有研究表明探索学习能明显促进脑梗死大鼠的行为学恢复[2],但对脑卒中后行为学能力恢复的分子作用机制尚不清楚。本研究拟观察探索学习对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围皮质巢蛋白 (nestin)及突触素 (synaptophysin,SYP)表达的影响,探讨探索学习对脑梗死后功能恢复影响的机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 清洁级雄性 SD大鼠 70只,3～4月龄,体质量 230～260 g,购自华中科技大学同济医学院实验动物学部。合格证号 SCXK(鄂)2004—0007。将动物随机分为大脑中动脉栓塞 (MCAO)模型组60只,假手术组 10只。

    1.2 试剂与仪器 戊巴比妥钠购自上海生工公司;多聚甲醛(分析纯)购自天津市化学试剂研究所;兔抗大鼠巢蛋白多克隆抗体购自北京中杉金桥;小鼠抗大鼠突触素多克隆抗体购自武汉博士德;笔式高温电灼器 (北京贝林电子有限公司);手术显微镜 (德国 Leica公司);光学显微镜 (日本 OLYMPUS公司);图像分析管理系统 (美国 Media Cybernetics公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 制备 MCAO模型及分组 参照 Bederson等[3]的方法制备 MCAO模型。术后 24 h将大鼠随机分为探索学习组 30只,手术对照组 30只。假手术组 10只,不电凝大脑中动脉,其余步骤与手术组相同。

    1.3.2 造模后饲养环境 (1)假手术组:饲养于标准笼,每笼 5只 ......