裴素霞,齐贵胜

    研究显示,转录因子 Twist、基质金属蛋白酶 (MMP)-2通过不同的途径在肿瘤发生、发展和转移等方面起着重要的作用[1-2]。本研究采用免疫组织化学法检测乳腺浸润性导管癌组织中 Twist、MMP-2的表达,探讨两者在乳腺浸润性导管癌浸润、转移过程中的作用及其相互关系。

    1 材料与方法

    1.1 标本来源 聊城市人民医院病理科存档的 2008年 1月—2009年 12月外检乳腺浸润性导管癌组织标本蜡块 68例 (患者术前均未经放疗、化疗及激素治疗),均为女性病例,年龄32～75岁,平均 51.04岁。患者年龄≤50岁者 31例, >50岁者 37例;肿块直径≤2 cm者 32例,2～5 cm者 20例,≥5 cm者 16例;伴有腋窝淋巴结转移者 31例,无腋窝淋巴结转移者37例;根据 Elson and Ellis半定量分级法进行组织学分级:Ⅰ级 23例,Ⅱ级 32例,Ⅲ级 13例。20例乳腺良性病变 (乳腺纤维腺瘤)为对照组。病理诊断经两位病理学专家复核证实。

    1.2 试剂 Twist鼠抗人单克隆抗体为 Santa Cruz公司产品(工作浓度为 1:200);鼠抗人 MMP-2单克隆抗体 (即用型),免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司,操作步骤按说明书进行。

    1.3 方法 所有标本均经 10%中性甲醛溶液固定,常规脱水,石蜡包埋。将每一例蜡块作 4μm厚的连续切片,免疫组化采用 Elivision Plus法检测标本组织中的 Twist和 MMP-2表达。用已知的阳性切片作为阳性对照,用 PBS代替一抗作为阴性对照。

    1.4 结果判断标准 Twist、MMP-2主要表达于细胞质中,以细胞质呈棕黄色或棕褐色颗粒为阳性。参照文献 [3-4]以半定量判断 Twist、MMP-2免疫组化结果:光镜下随机观察免疫组化染色切片 5个高倍镜视野,每个视野分别计算 200个细胞,共计数 1 000个细胞。从两方面对其进行评分:按阳性着色程度评分,0分为无着色;1分为浅黄色;2分为棕黄色;3分为棕褐色。再按阳性细胞所占比例评分:0分为阴性;1分为 <10%;2分为 11% ～50%;3分为 51%～75%;4分为 >75%。以两者乘积判定结果:4～l2分定为阳性,4分以下定为阴性 ......