捏脊结合针刺对糖尿病胃轻瘫新西兰兔血管活性肠肽含量的影响(1)
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摘要 目的：探讨捏脊结合针刺对糖尿病胃轻瘫新西兰兔胃窦和近端结肠组织中的血管活性肠肽含量的影响，进而探讨其对缓解DGP症状的作用机制。方法：综合采用链脲佐菌素腹腔注射、高热量饲料不规则喂养和熟地高渗溶液灌胃制备糖尿病胃轻瘫兔模型，将实验新西兰兔分为正常对照组、模型组、捏脊组、针刺组、捏脊针刺组、西沙必利组，经要求治疗2周后采用放射免疫法测定其胃窦和近端结肠组织中血管活性肠肽的含量。结果：与正常对照组比较，组织中血管活性肠肽的含量均下降(P<0.01)；与模型组比较，治疗组的血管活性肠肽的含量显著回升(P<0.05)，具有统计学意义；四个治疗组之间两两比较，血管活性肠肽的含量无显著差异(P>0.05)。结论：捏脊结合针刺能促进糖尿病胃轻瘫新西兰兔胃窦和近端结肠组织中血管活性肠肽的分泌，加快恢复胃肠动力。从而起到降血糖和促进胃肠排空的作用。
关键词 胃轻瘫，糖尿病 捏脊 针刺 血管活性肠肽 动物实验 影响 相关性
糖尿病胃轻瘫(diabetic gastroparesis，DGP)是指继发于糖尿病基础上的以胃动力低下、排空延迟，胃节律紊乱，从而导致胃潴留，但不伴有机械性梗阻为特点的一组临床症侯群，多见厌食、早饱、恶心呕吐、胃脘胀满、食后胀甚及体重减轻等症状，严重影响患者的生活质量，是糖尿病常见的慢性并发症之一。目前，DGP的发病机制尚未完全阐明，并且缺乏理想的治疗药物与手段，临床上西医多采用吗丁啉、西沙必利等促胃动力药进行对症治疗，有一定的疗效，但也存在不少的不良反应，且远期疗效不够理想，具有一定的局限性。然而，在中医理论指导下采用针灸推拿及药物治疗DGP则显示出一定的优势，越来越受到人们的重视。胃窦和近端结肠组织中血管活性肠肽的含量是调节胃肠道功能的重要因素，本实验旨在通过观察捏脊结合针刺对DGP新西兰兔血管活性肠肽分泌含量的影响，来进一步探讨此法的作用机制。
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1 实验研究
1，1 实验动物 普通级新西兰兔36只，体重1.8～2.3kg，雌雄各半，由广州中医药大学实验动物中心提供。
1，2 实验药品和试剂
1，2，1 实验药品：血糖仪及血糖试纸：美国Lifescan，international Inc.公司生产，安健尿糖试纸，JA21001电子称，SN-695B型放免γ测量仪：上海原子核研究所日环仪器厂生产。
1，2，2 实验试剂：链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)：美国Sigma公司产品，500mg/瓶，柠檬酸(Citricacid)：天津市大茂化学试剂厂产品，二水合柠檬酸三钠(柠檬酸三钠，Trisodium citrate dihvdrate)：广州化学试剂厂产品，羧甲基纤维素：广州中鹏原料有限公司产品
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1，3 药物配制
1，3，1 链脲佐菌素注射液的配制：取链脲佐菌素500mg溶于新鲜配制(不超过12小时)的柠檬酸钠缓冲液(PH4.5)25ml中，配制成浓度为2%的STZ溶液。
1，3，2 营养性半固体糊的制备：取材前一天将5g羧甲基纤维素溶于125ml蒸馏水中过夜，灌胃前再分别加入8g奶粉、4g糖、4g淀粉，搅拌均匀，配成150ml约150g的乳白色半固体糊状物。
1，4 实验方法
1，4，1 造模和分组：(1)综合链脲佐菌素溶液腹腔注射、高热量饲料不规则喂养和熟地灌胃制备糖尿病胃轻瘫动物模型。
模型制备：实验兔先适应性喂养3天，然后给予禁食12小时，将链脲佐菌素(sTZ)溶于0.1mmol/L的柠檬酸钠缓冲液中(PH=4.5)，浓度为1%，按照50mg/kg的剂量经腹腔内一次注射，注射后72小时测定非空腹耳缘静脉血糖值，血糖大于16.7mmol/L，同时尿糖在(+++)以上确定为糖尿病模型，造模组给予高热量饲料、不规则饲养(单日上午进食，双日下午进食)，同时灌服高渗熟地，按2ml/100g，正常对照组给予等剂量生理盐水腹腔注射，标准饲料喂养，等量生理盐水灌胃，余处理同前。实验兔分笼饲养17天后进行治疗，每天测量1次血糖(采用葡萄糖氧化酶一过氧化物酶法)，若造模新西兰兔血糖低于16.7mmol/L，则予以剔除，整个实验过程中不使用任何降糖药。
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(2)新西兰兔在相同条件下分笼饲养于清洁级动物实验室中，温度22～26℃，相对湿度60-80%，定时通风换气，常规喂养3天，随机分为正常对照组、模型组、针刺组、捏脊组，捏脊针刺组，西沙必利组，每组6只分笼饲养。
1，4，2 治疗方法：(1)捏脊组：将模型兔俯卧于操作台上，仿人取穴。医者两手半握拳，两食指抵于脊背之上，再以双手拇指伸向食指前方(拇指在前，食指在后；或食、中指在前，拇指在后)，把皮肤捏起，而后食指向前，拇指向后退，作翻转动作，两手同时向前移动，从长强穴开始，沿督脉由下向上随捏，随按，随拿，随推，随捻，随提，随放，一直捏到大椎穴处为1遍，如此捏24遍，第13遍始用“捏三提一”法，捏三下，向上提一下，目的在于加大刺激量，听见有响声效果最佳。捏完后用拇指沿督脉自命门至大椎，两侧沿膀胱经自肝俞至肾俞各直推100次，然后在脾俞穴、胃俞穴、肾俞穴处揉按各约1分钟，最后用手掌根部擦脊穴6遍。每日1次，连续2周；
(2)针刺组：根据《实验针灸学》有关动物取穴方法定位取中脘、内关、足三里穴，用0.5寸毫针直刺0.2寸，针刺用补法，留针15分钟，每日1次，连续2周；
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(3)捏脊针刺组：予捏脊后针刺治疗，每日1次，连续2周；
(4)西沙必利组：给予西沙必利水溶液(2mg/kg/)灌胃治疗，每日1次，连续2周。
1，5 观察指标及检测
1，5，1 基本项目：观察动物的体重、血糖、摄食量、并计算其胃内残留率和小肠推进率等情况。
1，5，2 胃窦和近端结肠组织中血管活性肠肽(VIP)测定：眼眶取血后迅速打开腹腔，先测定胃排空率和小肠推进率，再迅速剪取胃窦及长约0.5cm的近端结肠，称重后置于5ml 100%的生理盐水中煮沸3min，加入0.1N盐酸0.5ml于匀浆器中匀浆，于4℃条件下放置1～2h，再用0.1N的NaOH0.5ml中和，4℃离心(3000rpm)30min，取上清液于EP管中，一20℃冻存待测，根据试剂盒说明书，按放射免疫法测定胃窦和近端结肠组织中血管活性肠肽的含量。
1，6 统计学处理 采用SPSS11.0统计软件分析数据，所得数据均以表示，采用单因素方差分析；方差齐时采用LSD法(最小显著差异法)；方差不齐时采用Dunnett T3法。方差分析齐性检验水平α1=0.05，显著性检验水平α2=0.05。
2 实验结果
2，1 基本情况
2，1，1 造模后第1天，各组兔体重、血糖、摄食量等, http://www.100md.com(王曙辉 杨丽霞 何科杰 唐纯志)