病证结合思维对细胞推拿模型构建的启发(1)
摘要：从推拿学科在细胞水平研究的缺陷、目前细胞推拿模型构建的必要性及存在缺陷，研究可借鉴病证结合血瘀证血管内皮损伤模型，认为细胞推拿模型的研究中应该体现“病”“证”结合的特点，这一模型是当前中医手法科研所急需的，有助为中医证候模型研究及推拿学科的发展提供有益探索。
关键词：病证结合细胞推拿模型
【中图分类号】R224.1【文献标识码】B【文章编号】1008-1879(2012)11-0069-02
1“病证结合”的细胞推拿模型是当前中医手法科研所急需的
推拿的良好疗效已在全世界引起广泛关注，但在西方，推拿仍以补充医学形式出现，其功效还未被普遍接受，这与其作用机理尚未阐明有关，目前推拿治疗多着眼于软组织、骨关节、神经等层面，这些研究毕竟属于宏观研究，缺少微观的探讨，给临床、教学、科研带来诸多不便，严重制约推拿的发展，这是目前推拿学科存在的致命弱点。其中手法在细胞等微观层面的模型研发明显滞后。
, 百拇医药
在自然科学中，可说只要涉及到生物体的研究，都无一例外的要设计、使用模型。在国外每年都有大量模型用于科学实验。我国在模型研用上远远落后于国外。特别是中医病、证模型的研制更是滞后，明显地制约中医学发展[1]，推拿治病模型的研制也不例外。到目前为止，如何建立符合中医理论的，能够完全替代临床的符合“病证结合”的疾病推拿模型仍然是一个难题。基于单细胞分析的细胞组学研究给这一难题的解决带来了转机，模拟临床疾病建立起来的细胞模型可以反映生命活动最小单位的活细胞水平[2]。因此积极开展细胞模型研究将大大拓展疾病推拿模型的研究领域。因此从微观角度建立一种符合推拿学科的细胞力学模型就显得尤为重要，这一模型的要求既要符合中医“证”的特点，又要符合“病”的特点，对手法临床的发展意义重大[3]。
2建立模型的必要性
2.1动物模型的不足及中医证候模型忽略了“病证结合”。推拿治疗疾病过程中模型的制备必不可少，有着眼于软组织、骨关节等宏观层面的模型，也有着眼于细胞等微观层面的模型。就动物模型而言，其先天不足在于医学研究的对象在人类本身，其所得结论最终适用于解决人类本身问题[1]，并非鼠、兔、狗。如果完全将西医的实验医学模式套在中医身上，让中医理论在动物身上得到证实和认可，并由此揭示其本质思路是不现实的。比如把一个病人的症状和体征完完全全地复制到动物身上，是根本不可能办到的，因为人的生理病理、情感等完全不同。以椎动脉型颈椎病血瘀证大鼠模型为例，在大鼠体表所建之血瘀证模型，到底是人体血瘀证模型呢？还是大鼠血瘀证模型，毕竟大鼠身上不能体现中医的四诊，闻、问、切诊的内容全没了，只剩下大鼠体表形态。因此推拿中运用的证候动物模型多存在造模特异性差，缺乏对模型的辨证分型。
, 百拇医药
2.2目前动物模型存在的问题：有学者[4]以颈椎旁硬化剂注射法造成家兔椎动脉型颈椎病血瘀证模型作为病证结合动物模型，然后运用推拿手法对此模型进行干预。但是这一模型也存在不少缺点，众所周知：血瘀证是一个慢性过程，而几天时间的造模是否能反映血瘀证值得怀疑。目前血瘀证实验动物模型评判标准很少对模型动物细致观察，而仅以实验室指标，如血粘度、血液流变学为依据，其说服力是不够，中医特色不强。第二，造模因素过于简单：目前血瘀证动物模型多是单一因素造模，导致血瘀证的原因很多，如外邪、内伤、出血等原因，血瘀通常是各种因素长期相互作用的结果，因此单一因素造模难以反映血瘀证的病因病机。第三，缺少病证结合的模型：大多数血瘀证的动物模型是根据中医血瘀证的病因病机或西医学的血瘀病理生理改变而建立的[1]。第四造模缺少量化标准等。
3模拟推拿力学刺激对对细胞模型的干预
推拿手法本质是一种机械力，机械力对细胞生物学行为的影响是目前国际上细胞生物学领域研究的一个重要课题，将其引入推拿学领域具有重要意义，当手法作用于体表后必然对组织内的细胞产生机械刺激，进而激发细胞活性，并将物理性质的力学信号转换为生物性质的化学信号，引发其生物学效应，这可能是按摩发挥治病作用的细胞生物力学原理之一。研究表明血管内皮细胞在机械力的刺激下会引起Ca2+的内流，从而促发一系列生化反应[5]。也有学者提出：“活血化瘀”的细胞学机制和细胞内钙离子变化有关[6]。因此从细胞学领域研究揭示手法的活血化瘀功效意义重大。目前常采用体外压力刺激来模拟体外推拿(一维力学手法)，作为机械力之一压力刺激对细胞的生物学行为起重要的调节作用[7]。在压力作用下细胞往往受到刺激诱发钙离子内流增加、NO合成增加等[8]。
, 百拇医药
目前细胞推拿模型的特点及不足：对于细胞模型而言，许多人也进行积极探讨，如马惠昇等[9]通过推拿对血管内皮细胞进行干预构建了力学加载模型，陈波等[10]对SD大鼠分别进行膝关节以下外侧皮下组织块取样，利用模拟体外推拿对筋膜组织细胞进行干预构建一维力学加载模型，张宏等[11]采用细胞培养技术，建立骨骼肌细胞损伤模型，然后利用体外推拿进行干预也实现了力学加载模型。这三个模型都成功建立了细胞力学加载模型，但是都无一例外存在一个缺点，只是单纯的模拟了推拿对细胞模型的干预，都没有体现出中医学理论，尤其是“病证结合”的特点，同样是缺乏对模型的辨证分型。目前我们在研制符合疾病推拿的各种模型的时候，往往过分强调中医模型“病”的建立，而忽略了与中医“证”的结合。这将严重阻碍模型的研究工作，其研究成果也很难为推拿临床服务。
4病证结合血瘀证血管内皮损伤模型对病证结合细胞推拿模型的指导意义
既往笔者的导师陈利国教授成功构建病证结合血瘀证血管内皮损伤模型[1]，用20%浓度的高血压病血瘀证患者血清培养液作用于正常培养的人脐静脉内皮细胞株(ECV一304)，培养24h后观察细胞活性及功能的变化，然后运用具有活血化瘀或补气的中药进行干预，结果发现中药对高血压病血瘀证患者血清作用的细胞有着明显的保护作用，这一发现为我们建立病证结合细胞推拿模型提供了方法学上的借鉴。, 百拇医药(范志勇 陈利国 查和萍 彭志允 黄振)
关键词：病证结合细胞推拿模型
【中图分类号】R224.1【文献标识码】B【文章编号】1008-1879(2012)11-0069-02
1“病证结合”的细胞推拿模型是当前中医手法科研所急需的
推拿的良好疗效已在全世界引起广泛关注，但在西方，推拿仍以补充医学形式出现，其功效还未被普遍接受，这与其作用机理尚未阐明有关，目前推拿治疗多着眼于软组织、骨关节、神经等层面，这些研究毕竟属于宏观研究，缺少微观的探讨，给临床、教学、科研带来诸多不便，严重制约推拿的发展，这是目前推拿学科存在的致命弱点。其中手法在细胞等微观层面的模型研发明显滞后。
, 百拇医药
在自然科学中，可说只要涉及到生物体的研究，都无一例外的要设计、使用模型。在国外每年都有大量模型用于科学实验。我国在模型研用上远远落后于国外。特别是中医病、证模型的研制更是滞后，明显地制约中医学发展[1]，推拿治病模型的研制也不例外。到目前为止，如何建立符合中医理论的，能够完全替代临床的符合“病证结合”的疾病推拿模型仍然是一个难题。基于单细胞分析的细胞组学研究给这一难题的解决带来了转机，模拟临床疾病建立起来的细胞模型可以反映生命活动最小单位的活细胞水平[2]。因此积极开展细胞模型研究将大大拓展疾病推拿模型的研究领域。因此从微观角度建立一种符合推拿学科的细胞力学模型就显得尤为重要，这一模型的要求既要符合中医“证”的特点，又要符合“病”的特点，对手法临床的发展意义重大[3]。
2建立模型的必要性
2.1动物模型的不足及中医证候模型忽略了“病证结合”。推拿治疗疾病过程中模型的制备必不可少，有着眼于软组织、骨关节等宏观层面的模型，也有着眼于细胞等微观层面的模型。就动物模型而言，其先天不足在于医学研究的对象在人类本身，其所得结论最终适用于解决人类本身问题[1]，并非鼠、兔、狗。如果完全将西医的实验医学模式套在中医身上，让中医理论在动物身上得到证实和认可，并由此揭示其本质思路是不现实的。比如把一个病人的症状和体征完完全全地复制到动物身上，是根本不可能办到的，因为人的生理病理、情感等完全不同。以椎动脉型颈椎病血瘀证大鼠模型为例，在大鼠体表所建之血瘀证模型，到底是人体血瘀证模型呢？还是大鼠血瘀证模型，毕竟大鼠身上不能体现中医的四诊，闻、问、切诊的内容全没了，只剩下大鼠体表形态。因此推拿中运用的证候动物模型多存在造模特异性差，缺乏对模型的辨证分型。
, 百拇医药
2.2目前动物模型存在的问题：有学者[4]以颈椎旁硬化剂注射法造成家兔椎动脉型颈椎病血瘀证模型作为病证结合动物模型，然后运用推拿手法对此模型进行干预。但是这一模型也存在不少缺点，众所周知：血瘀证是一个慢性过程，而几天时间的造模是否能反映血瘀证值得怀疑。目前血瘀证实验动物模型评判标准很少对模型动物细致观察，而仅以实验室指标，如血粘度、血液流变学为依据，其说服力是不够，中医特色不强。第二，造模因素过于简单：目前血瘀证动物模型多是单一因素造模，导致血瘀证的原因很多，如外邪、内伤、出血等原因，血瘀通常是各种因素长期相互作用的结果，因此单一因素造模难以反映血瘀证的病因病机。第三，缺少病证结合的模型：大多数血瘀证的动物模型是根据中医血瘀证的病因病机或西医学的血瘀病理生理改变而建立的[1]。第四造模缺少量化标准等。
3模拟推拿力学刺激对对细胞模型的干预
推拿手法本质是一种机械力，机械力对细胞生物学行为的影响是目前国际上细胞生物学领域研究的一个重要课题，将其引入推拿学领域具有重要意义，当手法作用于体表后必然对组织内的细胞产生机械刺激，进而激发细胞活性，并将物理性质的力学信号转换为生物性质的化学信号，引发其生物学效应，这可能是按摩发挥治病作用的细胞生物力学原理之一。研究表明血管内皮细胞在机械力的刺激下会引起Ca2+的内流，从而促发一系列生化反应[5]。也有学者提出：“活血化瘀”的细胞学机制和细胞内钙离子变化有关[6]。因此从细胞学领域研究揭示手法的活血化瘀功效意义重大。目前常采用体外压力刺激来模拟体外推拿(一维力学手法)，作为机械力之一压力刺激对细胞的生物学行为起重要的调节作用[7]。在压力作用下细胞往往受到刺激诱发钙离子内流增加、NO合成增加等[8]。
, 百拇医药
目前细胞推拿模型的特点及不足：对于细胞模型而言，许多人也进行积极探讨，如马惠昇等[9]通过推拿对血管内皮细胞进行干预构建了力学加载模型，陈波等[10]对SD大鼠分别进行膝关节以下外侧皮下组织块取样，利用模拟体外推拿对筋膜组织细胞进行干预构建一维力学加载模型，张宏等[11]采用细胞培养技术，建立骨骼肌细胞损伤模型，然后利用体外推拿进行干预也实现了力学加载模型。这三个模型都成功建立了细胞力学加载模型，但是都无一例外存在一个缺点，只是单纯的模拟了推拿对细胞模型的干预，都没有体现出中医学理论，尤其是“病证结合”的特点，同样是缺乏对模型的辨证分型。目前我们在研制符合疾病推拿的各种模型的时候，往往过分强调中医模型“病”的建立，而忽略了与中医“证”的结合。这将严重阻碍模型的研究工作，其研究成果也很难为推拿临床服务。
4病证结合血瘀证血管内皮损伤模型对病证结合细胞推拿模型的指导意义
既往笔者的导师陈利国教授成功构建病证结合血瘀证血管内皮损伤模型[1]，用20%浓度的高血压病血瘀证患者血清培养液作用于正常培养的人脐静脉内皮细胞株(ECV一304)，培养24h后观察细胞活性及功能的变化，然后运用具有活血化瘀或补气的中药进行干预，结果发现中药对高血压病血瘀证患者血清作用的细胞有着明显的保护作用，这一发现为我们建立病证结合细胞推拿模型提供了方法学上的借鉴。, 百拇医药(范志勇 陈利国 查和萍 彭志允 黄振)