电针预处理对急性肺损伤大鼠炎症反应及PINK1、parkin蛋白表达的影响*
造模,空白对照,1材料与方法,2结果,3讨论
谭金曲,周 君,孙光华,刘丹妮,黄夏荣,罗 敷,周桂娟,屈萌艰,彭 婷,曾亚华(南华大学衡阳医学院附属第一医院,湖南 衡阳 421001)
急性肺损伤(acute lung injury,ALⅠ)是各种原因导致的以低氧血症为特征,最终导致呼吸衰竭的临床病症[1]。ALⅠ的病理核心是炎症反应,PⅠNK1是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,与自噬、凋亡、氧化应激、释放突触递质和线粒体钙离子稳态等有密切联系,Parkin 是PⅠNK1 的 下游 蛋白[2]。研 究发 现PⅠNK1/Parkin 介导的线粒体自噬参与ALⅠ炎症反应[3]。调控PⅠNK1/Parkin 表达,促进线粒体自噬,可以抑制炎症反应、细胞焦亡,起到保护肺组织的作用,可作为治疗靶点。电针对ALⅠ有确切的治疗作用,能明显缓解ALⅠ炎症反应、减轻肺水肿[4],但电针治疗急性肺损伤的机制尚未完全阐明。本次研究通过观察经电针预处理后ALⅠ大鼠血清中白细胞介素-6(interleukin-6, ⅠL-6)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)等炎症因子水平及肺组织中PⅠNK1、parkin 蛋白表达的变化,探讨电针对ALⅠ的疗效及机制,为电针防治ALⅠ提供一定实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物24 只3 月龄清洁级雄性大鼠,体质量(327.0±10.7)g,购买自湖南省斯莱克景达实验动物有限公司,合格证号为SYXK(湘)2020-0002。饲养于南华大学实验动物中心,动物分笼饲养,盒笼备有垫料、饲料和饮水,将室温调至20-26 ℃,将湿度调至50-60%,模拟正常昼夜更替。常规饲养1 周后开始实验。实验所需操作均符合我国《实验动物管理条例》及我院伦理委员会( 批准号:202012100289)的相关规定。
1.2 主要试剂与仪器 试剂:常规化学试剂、Tween-20、APS:中国上海国药(货号:71033942、10002618、30189328);Tris、甘 氨 酸:美 国Sigma(货 号:Ⅴ900483、Ⅴ900144);蛋白酶抑制剂、蛋白磷酸酶抑制剂:上海爱必信生物科技有限公司(货号:583794、P1260);显影液、定影液:中国上海佳信(BW-61、BW-62);LPS:北京百奥莱博科技有限公司(货号:BK-001)。仪器:台式冷冻离心机:济南童鑫生物科技有限公司(货号:H1650R);电泳仪、电泳槽、转膜仪:中国北京六一(货号:DYY-6C、DYCZ-24DN、DYCZ-40D);电子天平:美国双杰(货号:JJ224BC);普通冰箱:中国奥克斯(货号:BCD-196A);PCR 仪、荧光PCR 板:湖南中美仪器有限公司(货号:HD4925、GL-88B) ......
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