ABCA1基因R219K多态性与广西汉族心血管疾病的关系(2)
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1.2 生化指标检测
研究对象均采用禁食12h后，于清晨空腹采血，测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、载脂蛋白A(ApoA)、载脂蛋白B(ApoB)、空腹血糖以及血红蛋白、白细胞、血小板计数、肝、肾功能等生化指标，由检验科专人质控检验 。各指标均采用盲法测定。
1.3 基因组DNA提取及基因型分析
1.3.1 基因组DNA提取 全血用EDTA抗凝，使用标准的酚-氯仿提取法提取白细胞DNA，溶于TE，4℃贮存备用。
1.3.2 PCR扩增 PCR反应体系为25μl，含有基因组DNA 0.1~0.3μg，上游和下游引物分别为10pmol，dNTP mix 0.25mmol，Taq 酶0.5U，10×缓冲液2.5μl，MgCl2 20mmol及灭菌去离子水适量，应用自动循环仪进行扩增。扩增条件：预变性94℃ 4min，反应循环：变性94℃ 50s、退火58℃ 50s、延伸72℃ 1min，循环32次；最后72℃延伸10min。扩增产物经2 %琼脂糖凝胶电泳检测。引物设计参考有关文献[3]，由上海生工生物
1.3.3基因型分析上述PCR产物以限制性核酸内切酶Xag I(MBI,Fermentas) 37℃ 酶切2~3h。反应液终体积20μL，PCR反应产物10μL，Xag I内切酶10U。酶切产物在2%琼脂糖凝胶中电泳,溴乙啶染色，在UVP凝胶成像系统下观察电泳结果并确定基因型。R219K多态性位点的PCR扩增产物长177 bp ......
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