人EFNB2基因shRNA表达载体的构建及表达
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谢秋群 唐雄志 罗兆芹 桂林市人民医院妇产科;
【摘要】目的:构建针对人EFNB2基因的特异性shRNA真核表达载体,并在宫颈癌Hela细胞中表达。方法:运用基因工程技术构建pEFNB2-shRNA载体,转染Hela细胞,通过RT-PCR及Western blot检测干扰效率,筛选抑制作用明显的载体。结果:构建获得的pEFNB2-shRNA表达载体能够有效抑制EFNB2基因的表达(P0.05),其中以pEFNB2-shRNA1的抑制作用最强,对EFNB2mRNA表达的抑制率为81.2%,对蛋白表达的抑制率为69.7%。结论:shRNA EFNB2能有效下调EFNB2基因表达水平。
【关键词】 shRNA EFNB 基因表达
【基金】桂林市科技科技成果转化与应用项目(20080320-4)
【分类号】R346
EFNBZ基因定位于人类3号染色体q33,编码ePhrinBZ蛋白,是目前已知的酪氨酸蛋白激酶受体家族中最大的一个亚家族Eph/ePhrin家族成员之一。近年来的研究表明Eph家族尤其是EphB4/ePhrinBZ在肿瘤发生和血管生成过程中起重要作用卜2〕.有研究发现ephrinBZ在宫颈癌细胞中表达明显
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摘要:目的:构建针对人EFNB2基因的特异性shRNA真核表达载体,并在宫颈癌Hela细胞中表达。方法:运用基因工程技术构建pEFNB2-shRNA载体,转染Hela细胞,通过RT-PCR及western blot检测干扰效率,筛选抑制作用明显的载体。结果:构建获得的pEFNB2-shRNA表达载体能够有效抑制EFNB2基因的表达(P<0.05),其中以pEFNB2-shRNA1的抑制作用最强,对EFNB2mRNA表达的抑制率为81.2%,对蛋白表达的抑制率为69.7%。结论:shRNAEFNB2能有效下调EFNB2基因表达水平。
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