1.3 牙周膜干细胞生物学特性的研究

    1.3.1细胞生长曲线测定：分别取筛选培养的牙周膜干细胞及牙周膜细胞，以1×103cells/孔接种于96孔塑料板，每组3孔，隔日换液。每天取一组，MTT法测各孔OD值，连续测10天，以时间为横轴、细胞数为纵轴绘制生长曲线。

    1.3.2 克隆形成率测定：将收集的对数生长期牙周膜细胞的培养上清1 500rpm离心10min，经0.22μm直径的小滤器过滤后，与培养基以l:l比例混合作为适应性培养基。取筛选培养的牙周膜干细胞，调整细胞密度至10～15个/ml，100μ1/孔接种于96孔培养板中，培养12h后标记单个细胞孔，并补液至200μ1/孔，5天换液，光镜下观察克隆形成情况。

    1.3.3 流式细胞仪分析

    1.3.3.1细胞周期分析：取筛选培养的牙周膜干细胞，胰酶消化，调整细胞密度为1×107/ml， PBS清洗2次，加入0.01mol/LPBS重悬，再加入预冷的无水乙醇2ml吹打混匀，4℃过夜，离心弃乙醇，0.01mol/LPBS清洗2次，加入5ml/L碘化丙锭1ml，4℃30min，过300目的尼龙筛网，流式细胞仪上机，进行细胞周期检测。

    1.3.3.2表面抗原测定：取筛选培养的牙周膜干细胞, 弃去培养液，PBS清洗两次，以含0.25% 胰蛋白酶的PBS液消化5 min ......